分枝桿菌

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1概述編輯本屬細菌的主要特點是細胞壁含有大量脂質,主要是分枝菌酸。這和其染色性、生長特性、致病性、抵抗力等密切相關。一般不易著色,若經加溫或延長染色時間而著色后能抵抗強脫色鹽酸乙醇的脫色,故又稱抗酸桿菌(acid-fast bacilli)。該菌屬無鞭毛、無芽胞、不產生內、外毒素,其致病性和菌體成分有關。引起的疾病都呈慢性,並伴有肉芽腫

2分類編輯分枝桿菌種類較多,可分為結核分枝桿菌複合群、非結核分枝桿菌麻風分枝桿菌三類。非結核分枝桿菌根據生長速度和產色等不同又分為4組。

3結核分枝桿菌編輯結核分枝桿菌(M.tuberculosis),俗稱結核桿菌結核菌,是引起結核病病原菌。可侵犯全身各器官,但以肺結核為最多見。結核病至今仍為重要的傳染病估計世界人口中1/3感染結核分枝桿菌。據WHO報道,每年約有800萬新病例發生,至少有300萬人死於該病。我國建國前死亡率達200-300人/10萬,居各種疾病死亡原因之首,建國後人民生活水平提高衛生狀態改善,特別是開展了群防群治,兒童普遍接種卡介苗,結核病的發病率和死亡率大為降低。但應注意,世界上有些地區因艾滋病吸毒免疫抑製劑的應用、酗酒和貧困等原因,發病率又有上升趨勢。

一、 生物學性狀

形態與染色結核分枝桿菌為細長略帶彎曲的桿菌,大小1~4X0.4 μm(圖14-1A)。牛分枝桿菌則比較粗短。分枝桿菌屬的細菌細胞壁脂質含量較高,約占干重的60%,特別是有大量分枝菌酸(mycolic acid)包圍在肽聚糖層的外面,可影響染料的穿入。分枝桿菌一般用萋-尼(Ziehl- Neelsen)抗酸染色法,以5% 石碳酸復紅加溫染色后可以染上,但用3%鹽酸乙醇不易脫色。若再加用美藍復染,則分枝桿菌呈紅色,而其他細菌和背景中的物質為藍色。

近年發現結核分枝桿菌在細胞壁外尚有一層莢膜。一般因製片時遭受破壞而不易看到。若在製備電鏡標本固定前用明膠處理,可防止莢膜脫水收縮。在電鏡下可看到菌體外有一層較厚的透明區,即莢膜,莢膜對結核分枝桿菌有一定的保護作用。

代謝結核分枝桿菌在體內外經青黴素環絲氨酸溶菌酶誘導可影響細胞壁中肽聚糖的合成異煙肼影響分枝菌酸的合成,巨噬細胞吞噬結核分枝桿菌后溶菌酶的作用可破壞肽聚糖,均可導致其變為L型,呈顆粒狀或絲狀(圖14-1B與C)。異煙肼影響分枝菌酸的合成,可變為抗酸染色陰性。這種形態多形染色多變在肺內外結核感染標本中常能見到。臨床結核性冷膿瘍和痰標本中甚至還可見有非抗酸性革蘭陽性顆粒,過去稱為Much顆粒。該顆粒在體內或細胞培養中能返回為抗酸性桿菌,故亦為L型。

培養特性專性需氧。最適溫度為37℃,低於30℃不生長。結核分枝桿菌細胞壁的脂質含量較高,影響營養物質的吸收,故生長緩慢。在一般培養基中每分裂1代需時18~24h,營養豐富時只需5h。

初次分離需要營養豐富的培養基。常用的有羅氏(Lowenstein-Jensen)固體培養基,內含蛋黃、甘油、馬鈴薯無機鹽和孔雀綠等。孔雀綠可抑制雜菌生長,便於分離和長期培養。蛋黃含脂質生長因子,能刺激生長。根據接種菌多少,一般2~4周可見菌落生長。菌落呈顆粒、結節或花菜狀,乳白色或米黃色,不透明。在液體培養基中可能由於接觸營養面大,細菌生長較為迅速。一般1~2周即可生長。臨床標本檢查液體培養比固體培養的陽性率高數倍。

生化反應結核分枝桿菌不發酵糖類。與牛分枝桿菌的區別在於結核分枝桿菌可合成煙酸和還原硝酸鹽,而牛分枝桿菌不能。熱觸酶試驗對區別結核分枝桿菌與非結核分枝桿菌有重要意義。結核分枝桿菌大多數觸酶試驗陽性,而熱觸酶試驗陰性; 非結核分枝桿菌則大多數兩種試驗均陽性。熱觸酶試驗檢查方法是將濃的細菌懸液置68?C水浴加溫20min,然後再加H2O2。 觀察是否產生氣泡,有氣泡者為陽性。

抵抗力結核分枝桿菌細胞壁中含有脂質,故對乙醇敏感,在70%乙醇中2min死亡。此外,脂質可防止菌體水分丟失,故對乾燥的抵抗力特彆強。粘附在塵埃上保持傳染性8~10d,在乾燥痰內可存活6~8個月。結核分枝桿菌對濕熱敏感,在液體中加熱62~63℃ 15min或煮沸即被殺死。結核分枝桿菌對紫外線敏感。直接日光照XX數小時可被殺死,可用於結核患者衣服、書籍等的消毒

結核分枝桿菌的抵抗力與環境中有機物的存在有密切關係,如痰液可增強結核分枝桿菌的抵抗力。因大多數消毒劑可使痰中蛋白質凝固,包在細菌周圍,使細菌不易被殺死。5% 石碳酸在無痰時30min可殺死結核分枝桿菌,有痰時需要24h; 5% 來蘇兒無痰時5min殺死結核分枝桿菌,有痰時需要1~2h。

結核分枝桿菌對酸(3% HCl或6% H2SO4) 或鹼(4% NaOH) 有抵抗力,15min不受影響。可在分離培養時用於處理有雜菌污染的標本和消化標本中的粘稠物質。結核分枝桿菌對1:13 000孔雀綠有抵抗力,加在培養基中可抑制雜菌生長。結核分枝桿菌對鏈黴素、異煙肼、利福平、環絲氨酸、乙胺丁醇卡那霉素、對氨基水楊酸等敏感,但長期用藥容易出現耐藥性,而吡嗪酰胺的耐藥性