豬瘟俗稱「爛腸瘟」,是由黃病毒科豬瘟病毒屬的豬瘟病毒引起的一種急性、發熱、接觸性傳染傳染病。具有高度傳染性和致死性。
豬瘟俗稱"爛腸瘟"是一種具有高度傳染性
疫病,是
威脅養豬業的主要傳染病之一,其特徵是:急性,呈
敗血性變化,實質
器官出血,
壞死和
梗死;
慢性呈
纖維素性
壞死性腸炎,
後期常有
副傷寒及
巴氏桿菌病繼發。
是豬的一種急性接觸性傳染病,又稱
豬霍亂。1885年首先在美國發現,以後
傳播到世界各大洲。中國大部分省都有發生。1903年美國
獸醫學家德希尼茲和多賽特
鑒定本病的
病原是披蓋病毒科的瘟病毒屬(
Pestivirus)中的豬瘟病毒。主要通過直接接觸,或由於接觸
污染的媒介物而
發病。
消化道、
鼻腔粘膜和XX的
皮膚均是感染途徑。一年四季都可發生,以春夏多雨季節為多。
人工
接種的豬,一般在36~48小時后
體溫升高。而自然感染的潛伏期常為3~6天,間有延長到24天的。典型
病例表現為最急性、亞急性或慢XX程,死亡率高。最急性型較少見,病豬體溫升高,常無其他
癥狀,1~2天內死亡。急性型最常見,體溫可上升到41℃以上,
食慾減退或消失,可發生眼
結膜炎並有膿性
分泌物,鼻腔也常流出膿性粘液,間有
嘔吐,有時
排泄物中帶
血液,甚至
便血。
初期耳根、
腹部、股內側的皮膚常有許多
點狀出血或較
大紅點。病程一般為1~2周,最後絕大多數死亡。亞急性型常見於本病流行地區,病程可延至2~3周;有的轉為慢性,常拖延1~2個月。表現粘膜蒼白,
眼瞼有出血點。皮膚出現
紫斑,病豬極度
消瘦。死亡以仔豬為多,成年豬有的可以耐過。
非典型病豬臨診癥狀不明顯,呈慢性,常見於「架子豬」。剖檢時急性型以出血XX變為主,常見腎
皮質和
膀胱粘膜中有小點出血;
腸系膜淋巴結腫脹,常出現出血性腸炎,以
大腸粘膜中的鈕扣狀
潰瘍為典型。
根據
流行病學、臨診癥狀和病理變化可作出初診。
實驗室
診斷手段多採用
免疫螢光技術、酶聯
免疫吸附測定法、
血清中和
試驗、
瓊脂凝膠
沉澱試驗等,比較靈敏迅速,且
特異性高。中國現推廣應用免疫螢光技術和酶聯免疫吸附測定法。採用抗豬瘟血清在病初可有一定
療效,此外尚無其他特效藥物。中國的豬瘟兔化弱毒
疫苗免疫期可達一年以上,已被公認為一種安全性良好、
免疫原性優越、
遺傳性穩定的弱毒疫苗。
本病與非洲豬瘟不同。非洲豬瘟在中國迄今尚未發現。
流行特點
本病在自然條件下只感染豬,不同
年齡、
性別、品種的豬和
野豬都易感,一年四季均可發生。病豬是主要
傳染源,病豬排泄物和分泌物,病死豬和臟器及屍體、急宰病豬的血、肉、
內臟、廢水、廢料污染的
飼料,飲水都可散播病毒,豬瘟的傳播主要通過接觸,經消化道感染。此外,患病和弱
毒株感染的母豬也可以經
胎盤垂直感染
胎兒,產生弱仔豬、
死胎、木乃伊胎等。
潛伏期
簡介
一般為5—7天,根據
臨床癥狀可分為最急性、急性、慢性和溫和型四種類型。
最急性型
A:最急性型:病豬常無明顯癥狀,突然死亡,一般出現在初發病地區和
豬瘟
流行初期。
急性型
B:急性型:病豬
精神差,發熱,體溫在40—42℃之間,呈現
稽留熱,喜卧、弓背、
寒顫及行走搖晃。食慾減退或廢絕,喜
歡飲水,有的發生嘔吐。結膜
發炎,
流膿性分泌物,將上下眼瞼粘住,不能張開,鼻流膿性鼻液。初期
便秘,干XX糞球表面附有大量白色的腸粘液,後期
腹瀉,
糞便惡臭,帶有粘液或血液,病豬的鼻端、耳後根、腹部及
四肢內側的皮膚及
齒齦、唇內、
肛門等處粘膜出現針尖狀出血點,
指壓不退色,
腹股溝淋巴結腫大。公豬XX發炎,陰鞘積尿,用手擠壓時有惡臭渾濁
液體XX出。小豬可出現
神經癥狀,表現
磨牙、後退、轉圈、
強直、側卧及
游泳狀,甚至
昏迷等。
慢性型
C:慢性型:多由急性型轉變而來,體溫時高時低,
食慾不振,便秘與腹瀉交替出現,逐漸消瘦、
貧血,
衰弱,被毛粗亂,行走時兩後肢搖晃
無力,行走不穩。有些病豬的
耳尖、尾端和四肢下部成藍
紫色或壞死、
脫落,病程可長達一個月以上,最後衰弱死亡,死亡率極高。
溫和型
D:溫和型:又稱非典型,主要發生較多的是斷奶后的仔豬及架子豬,表現癥狀輕微,不典型,病情
緩和,病理變化不明顯,病程較長體溫稽留在40℃左右,皮膚無出血小點,但有
淤血和壞死,食慾時好時壞,糞便時干時稀,病豬十分
瘦弱,致死率較高,也有耐過的,但
生長發育嚴重受阻。
剖檢病變
急性型
全身皮膚、
漿膜、粘膜和內臟器官有不同程度的出血。全身淋巴結腫脹,
多汁、
充血、出血、外表呈現紫黑色,切面如大理石狀,
腎臟色淡,皮質有針尖至小米狀的出血點,
脾臟有梗寒,以邊緣多見,呈色黑小紫塊,
喉頭粘膜及
扁桃體出血。膀胱粘膜有散在的出血點。胃、腸粘膜呈卡他性炎症。大腸的
回盲瓣處形成紐扣狀潰瘍。
慢性型
主要表現為壞死性腸炎,全身性出血變化不明顯,由於
鈣磷代謝的擾亂,
斷奶病豬可見
肋骨末端和軟骨
組織變界處,因
骨化障礙而形成的黃色骨化線。
實驗室診斷
在口述診斷的基礎上,可用
免疫熒光抗體檢查,酶標記組織抗
原定位法,免體交互免疫試驗,血清中和試驗,豬瘟
單克隆抗體純化酶聯免疫吸附試驗等方法之一進行確診。
防治措施
預防:A、
免疫接種。B、開展免疫
監測,採用酶聯免疫吸附試驗或正向間
接
血凝試驗等方法開展
免疫抗體監測。C、及時淘汰
隱性感染帶毒種豬。D、堅持自繁自養,全進全出的飼養管理制度。E、做好豬場、豬舍的隔離、
衛生、
消毒和殺蟲工作,減少豬瘟病毒的侵入。
A、立即
報告,及時診斷。B、劃定
疫點。C、封鎖疫點、
疫區。D、處理病豬,做出無害化處理。E、緊急
預防接種。疫區里的
假定健康豬和受威脅地區的生豬即接種豬瘟免弱毒疫苗。F、消毒,認真消毒被污染的場地、圈舍、用具等,糞便堆積
發酵、無害化處理豬瘟(hog cholera,HC或SWliqe fever, sF)
疫苗種類
豬瘟是一種傳染性非常強的傳染病,常給養豬業造成毀滅性損失。預防豬瘟最有效的方法就是接種豬瘟疫苗。為了使廣大養豬戶正確選擇和有效
使用豬瘟疫苗,這裡將豬瘟疫苗的種類和使用方法簡介如下: 疫苗的種類
目前市場上預防豬瘟的疫苗主要有以下三種:
1.豬瘟活疫苗(I)———乳兔苗。
2.豬瘟活疫苗(II)———
細胞苗。
3.豬瘟活疫苗(I)———淋脾苗。
使用方法
豬瘟活疫苗(I)———乳兔苗的用法該疫苗為
肌肉或皮下注XX。使用時按瓶簽註明頭份用
無菌生理鹽水按每頭份1毫升稀釋,大小豬均為1毫升。該疫苗禁止與菌苗同時注XX。注XX本苗后可能有少數豬在1天-2天內發生
反應,但3日後即可
恢復正常。注苗后如出現
過敏反應,應及時注XX
抗過敏藥物,如
腎上腺素等。該疫苗要在-15℃以下避光
保存,
有效期為12個月。該疫苗稀釋后,應放在
冷藏容器內,嚴禁結冰,如氣溫在15℃以下,6小時內要用完;如氣溫在15℃-27℃,應在3小時內用完。注XX的
時間最好是進食后2小時或進食前。
豬瘟活疫苗(II)———細胞苗的用法該疫苗大小豬都可使用。按
標籤註明頭份,每頭份加入無菌生理鹽水1毫升稀釋后,大小豬均皮下或肌肉注XX1毫升。注XX4天後即可產生
免疫力,注XX后免疫期可達12個月。該疫苗宜在-15℃以下保存,有效期為18個月。注XX前應了解當地確無疫病流行。隨用隨稀釋,稀釋后的疫苗應放冷暗處,並限2小時內用完。斷奶前仔豬可接種4頭份疫苗,以防母源抗體干擾。
豬瘟活疫苗(I)———淋脾苗的用法該疫苗為肌肉或皮下注XX。使用時按瓶簽註明頭份用無菌生理鹽水按每頭份1毫升稀釋,大小豬均1毫升。該疫苗應在-15℃以下避光保存,有效期為12個月。疫苗稀釋后,應放在冷藏容器內,嚴禁結冰。如氣溫在15℃以下,6小時內用完。如氣溫在15℃-27℃,則應在3小時內用完。注XX的時間最好是進食后2小時或進食前。
注意事項
以上三種疫苗在沒有豬瘟流行的地區,斷奶后無母源抗體的仔豬,注XX1次即可。
在有疫情威脅時,仔豬可在21日齡-30日齡和65日齡左右各注XX1次。
被注XX疫苗的豬必須健康無病,如豬
體質瘦弱、有病,體溫升高或食慾不振等均不應注XX。
注XX免疫用各種工具,須在用前消毒。每注XX1頭豬,必須更換一次煮沸消毒過的
針頭,嚴禁打「飛針」。
注XX
部位應先剪毛,然後用
碘酒消毒,再進行注XX。
以上三種疫苗如果在有豬瘟發生的地區使用,必須由獸醫嚴格指導,注XX後防疫人員應在1周內進行逐日觀察。
簡介
在歐洲稱為古典豬瘟{classical swine fever.CSF),是由豬瘟病毒(HCV或CSFV)引起的一種高度接觸性傳染病,豬是該病毒唯一的自然宿主。于1833年首次發現於美國俄亥俄州,百余年來其流行遍及全球。國際獸疫局將其定為A類傳染病,中國《動物防疫法》將其列為一類傳染病.是目前危害中國養豬業
發展的主要疫病之一。中國豬瘟兔化弱毒疫苗在防治豬瘟中曾起到決定性作用,但近幾年來出現
免疫效果不
理想.應用
組織培養弱毒苗也發生免疫失敗,究其原因比較多。由於豬瘟造成的
經濟損失巨大.歷來是各國研究的熱點。
csFV基因結構與功能的研究
CSFV為有
囊膜病毒,40--60 nm,單股正鏈RNA。CSFV
基因組長約1 2 3 kb,僅含有一個大的開放性閱讀框架(ORF).此ORF翻譯成含3898個
氨基酸殘基.
分子量約438 kDa的多聚
蛋白,並進一步在病毒和
宿主細胞蛋白酶的作用下加工為成熟蛋白.cSFV的所有結構蛋白和非結構蛋白均由該ORF所編碼。ORF兩側是5』一端非翻譯區(5』-UTR)和3』一端非翻譯區(3』-UTR).且5』一端無帽子結構.3』一端無poly(A)尾巴。這一大前體蛋白以共翻譯和后翻譯的形式在細胞蛋白酶和病毒特異蛋白酶作用下.加工成結構蛋白和非結構蛋白,其結構蛋白和非結構蛋白在病毒RNA上的編碼順序為Npro、c、Erns(E0)、E1、E2、P7、NS2-3、NS4A、NS4B、 NS5A、NS5B。NS2-3可被加工成NS2、NS3(P80),除c、E0、E1和E2為結構蛋白外.其餘均為非結構蛋白。
目前已經定位的CSFV蛋白有5種,即 Npro、c、Erns(E0)、E1和E2.它們均由CSFV的 RNA-ORF5』一端所編碼。在結構蛋白中,最具有免疫
防制研究
價值的是EO和E2。
1.1 c,是病毒的
衣殼蛋白,也稱p14,由病毒ORF中的Setl 69~Al a267組成.是 CSFV
核衣殼蛋白其N端由CSFV非結構蛋白p23的
水解作用產生,c端可能是由宿主細胞的信號肽酶作用所致。
1.2 gp44/48,是病毒的一種囊膜
糖蛋白.也稱Erns.舊稱E0。有9個可能的糖基化
位點,去糖基的蛋白
骨架分子量約26KDa,由病毒ORF中Glu168-Ala494組成。在感染細胞中gp44/48在
內質網內
積累,並可
存在於
細胞膜表面或被分泌到胞外。在
病毒粒子中gp44/48以97KDa的
同源二聚體形式存在於囊膜表面。由於其分子內缺乏疏水的膜
錨定區,與病毒囊膜結
合力弱.易從囊膜上
遊離下來。gp44/48可誘導產生豬瘟的
中和抗體.免疫豬可誘導產生對
致死量CSFV的保護性免疫。由於編碼 gp44/48的
核酸序列在屬內比編碼gp55的序列保守程度高,因此E rns可作為防治豬瘟的一種靶蛋白。
Erns具有RNase活性,作用於單鏈的 RNA.且對富含u的序列活性最高。4ng的 Ems在體外即可將CSFV基因組RNA完全
降解。推測Ems沒有將其自身RNA降解掉的原因可能是由於空間上的隔離。在宿主細胞中,新
合成的E rns在內質網腔內.而其基因組RNA則在
胞漿中:在病毒粒子中,定位於囊膜的Ems與其基因組RNA間隔著衣殼蛋白.因此E rns是不會降解其自身RNA的。編碼Ems的基因是瘟病毒屬病毒所特有的.
黃病毒科中其他
病毒基因組內無此基因.推測該基因是病毒與宿主細胞的RNase
基因重組得到的。
1.3 gp33,是CSFV囊膜糖蛋白.也稱E1,去糖基的蛋白骨架分子量21.8KDa.由1 95個
氨基酸殘基(ORF編碼的Leu495至GlY68。組成,內有3個可能的糖基化位點。其蛋白骨架中有兩段疏水序列(Leu548~ Pro579~Gly689)。在多聚蛋白轉位過程中,前一段是E1向內質網腔轉位的
終止信號,后一段則充當E2轉位的信號肽,除此之外,這二段疏水區還充當E1的膜錨定位點。E1在病毒囊膜內.不能誘導豬產生抗體。
1.4 gp55.為CSFV的另一囊膜糖蛋白,又稱為E2,是病毒主要的
抗原蛋白,也是三個病毒糖蛋白中保守性最低.最易
變異的分子。gp55常以100kDa的同源二聚體及與gp33形成75kDa的異源二聚體形式存在於病毒粒子及CSFV感染的
細胞表面。在體外gp55可誘導產生病毒的中和抗體,體內可誘導產生抗CSFV的攻擊的抗體。Hulst用20μg昆曳細胞
表達的E2雙相油包
水乳劑免疫豬,能抵抗1 00LD50 CSFV Brescia毒株強毒的攻擊。gp55的蛋白骨架由370個氨基酸(ORF編碼的690-1060氨基酸殘基)組成.並以其c端的40個疏水氨基酸錨定在膜上。由於糖基化程度不同。E2的分子量可為51-58kDa。E2分子內的1 5個Cys殘基在屬內均保守,其中N端6個Cys殘基參與抗原結構域的形成,c端9個Cys殘基則參與同源、異源二聚體的形成。
gp55的抗原決定區在其N端部分(ORF編碼的第690-866氨基酸),可分為2個獨立的抗原結構單元,四個抗原結構域A.B.C,D。其中結構域A又可分為A., A2,A3三個亞域。結構域B.c屬於一個結構單元.均為中和抗體的結合位點.由 ORF編碼的690~800氨基酸殘基參與構成。Cys693與CYS7377形成的
二硫鍵對結構域 B、c的空間結構至關重要。另一個結構單元含A.D抗原結構域。A1、A2亞區定位於第795-851氨基酸殘基,在種內保守A1是一個抗體的中和位點。亞區A3定位於766-813氨基酸殘基.而氨基酸殘基766-800則參與了結構域D的構成。cys792~ Cys856及Cys818~Cys828間的二硫鍵對這個結構單元空問結構的形成是必需的。連接這兩個結構單元的是一段屬內保守的疏水序列.推測這段序列參與了病毒侵入細胞過程中的膜
融合過程。
1.5 Npro,也稱p23,CSFV的非結構蛋白,是ORF編碼的多聚蛋白N端的第一個
蛋白質。Npro由168個氨基酸組成.具有蛋白質水解酶活性,能以自
催化的方式從正在翻譯的多聚蛋白上
斷裂下來,成為成熟的病毒蛋白。序列比較發現,編碼p2 3的基因在瘟病毒屬中是較為保守的。它的斷裂位點在Cysl 68與其下游的病毒核衣殼p1 4 N端第一個氨基酸ser。間。Npro的 cys69和His130可能位於其酶活性中心.能水解斷裂Cys與Ala及Gly與Ser間的
肽鍵,斷列位點位於活性His殘基下游38個氨基酸殘基處。Npro不參與CSFV的結構及非結構蛋白的加工過程.其蛋白酶活性在 c S F V
增殖過程中的作用還不清楚。Rumenapf等人使用定
點突變技術對參與 Npro催化活性的氨基酸殘基進行測定.確定了其中的GIu22、His49和Cys69是保持Npro蛋白酶活性所必需的氨基酸殘基,而 His130並非必須。
實驗窒診斷
目前豬瘟流行常常表現無規律的地區性
散發.發病特徵不典型,以發熱、精神沉鬱、食慾減退、
咳嗽、
共濟失調、
結膜炎以及腹瀉、
圍產期死亡、死胎、
流產。中等
毒力及強毒感染有以上這些癥狀,並且在豬群中不分年齡快速傳播。結合這些臨床癥狀進行實驗室診斷是必要的。
2.1 病毒抗原的檢測豬瘟病毒抗原的快速檢測對於豬瘟的診斷具有特別重要的意義。目前快速、敏感的檢測方法是
利用免疫組化技術檢測扁桃體組織。扁桃體中豬瘟病毒抗原可早在感染后2d檢測到.淋巴結、脾臟以及
胰腺均可作為病毒早期檢測的組織樣品。Delas Mulas等及Narita等報道了一種檢測豬瘟病毒抗原的免疫組化方法.即利用針對E2糖蛋白的單克隆抗體檢測
福爾馬林固定、
石蠟包埋的組織樣品的免疫組化方法。該方法的優點是能檢測長期保存的樣品,缺點是較費時.而且福爾馬林固定后的組織不能再進行病毒
分離。利用鏈酶一
生物素一
過氧化物酶(ABc)的免疫組化方法也能用於豬瘟病毒組織切片上抗原的檢測。據報道
流式細胞儀也可進行血樣中豬瘟病毒的檢測,但其敏
感性較低。以豬瘟強毒感染仔豬,利用抗原捕獲ELISA方法檢測其
病毒血症,結果表明該方法可用於豬群中流行病學的
調查。但其敏感性以及特異性均低於傳統的實驗室方法。
2.2 感染XX毒的檢測病毒分離是目前體外檢測
感染性豬瘟病毒最特異的方法。已報道有幾種方法可以從組織、
全血中分離病毒,
白細胞是分離病毒的最佳樣品。然而一些研究人員發現,白細胞以及
單核細胞在動物感染后較長時間
才能感染病毒。因此,對於豬瘟的早期診斷.全血或
血漿可能比白細胞更為敏感。最常用於豬瘟病毒分離的細胞為
豬腎細胞(PKl 5或SK6)或豬XX細胞(sT)。
日本建立了一種豬腎由來的傳代
細胞系(FS-L3).FS-L3細胞在不感染病毒的情況下呈大園球狀.數倍
至數十倍于普通細胞.但一旦感染了豬瘟病毒,FS-L3細胞的大園球狀即消失.這一特性已被用作豬瘟病毒的中和試驗等各種
生物學特性的測定。經研究發現,產生細胞病變的毒株是因為它的
遺傳基因發生了變化。從5』末端的第一個
核苷酸到4764個核苷酸均已
缺失.其中包括5』末端的非
編碼區、自身蛋白分解酶、衣殼蛋白、糖蛋白(E0、 E1、E2)、非結構蛋白NS-1、和NS-2的基因均已缺失。
2.3 豬瘟病毒基因組檢測 已報道利用
RT-PCR方法檢測豬瘟病毒RNA有數種程序。瘟病毒屬特異的
引物多選自基因組的5』端保守區.其最突出的優點是其產物能用來直接測序,直接進行病毒株的分型。一般來說套式RT-PCR方法是檢測豬瘟病毒更敏感的方法,但其缺點是比較費時.
不適用於大量樣品的檢測。McGoldrick等報道了一種檢測豬瘟病毒的單管熒光RT-PCR方法。此方法可檢測出仔
豬血樣中感染了中等毒力或高等毒力的豬瘟病毒,其敏感性高於病毒分離方法.並且簡化了試驗程序.減少了污染的風險.還可進行大量樣品的檢測。
2.4 抗體檢測最常用的檢測豬瘟病毒抗體的方法多以病毒中和試驗為基礎。目前已建立數個特異的檢測
血清抗體的E LlSA方法.包括檢測針對粗蛋白、特異結構蛋白如E2、E rns以及非結構蛋白NS3抗體的方法。目前使用最廣泛的是CSFV E2 ELISA,其敏感性與VNT相比為90%~99%.特異性為99%。Leforban等建立了一種ELISA方法,能夠區分BVDV、BDV以及 CSFV抗體。這個方法對於BVDV/BDV高流行地區(如荷蘭)csF的檢測非常有意義。ELISA特異性與敏感性的
提高是目
前面臨的最大的挑戰。
當前,豬瘟仍是世界養豬業的一大威脅.1 997-1 999年期間在德國、荷蘭、西班牙和義大利等國都曾多次
暴發了豬瘟,在中國CSFV的持續性感染和疫苗保護
效力下降的
現象也比較普遍,這不僅給養豬業造成了嚴重的經濟損失,而且也給豬瘟防治政策的制定帶來了一定的困難。不過,相信隨著CSFV
分子生物學和檢測方法研究的進一步深入,這些問題都會得到最終解決。