HBV-DNA

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HBV-DNA即是乙肝病毒的脫氧核糖核酸(即乙肝病毒基因)。 HBV-DNA是HBV感染最直接、特異性強和靈敏性高的指標,HBV-DNA陽性,提示HBV複製和有傳染性。HBV-DNA越高表示病毒複製越厲害,傳染性強。

基本分類

  [1] [2] [3-4]HBV-DNA即 乙肝病毒脫氧核糖核酸。病毒從結構上分為兩類,一類是RNA病毒(核糖核酸病毒),另

HBV-DNA結構圖

一類是DNA病毒(脫氧核糖核酸病毒),乙肝病毒屬於後者。病毒與細菌不同,細菌體內含有兩種核酸(RNA和DNA),而病毒體內只含有一種核酸,或RNA或DNA。核酸是病毒的核心部分,病毒的基因都在這裡,沒有核酸,病毒就不能複製。[5]

HBV感染初期cccDNA的形成

  研究證實, HBV cccDNA是最先能檢測到的複製中間體.HBV特異的RNA,單鏈DNA(ssDNA)均晚于cccDNA形成,因此認為cccDNA是病毒前基因組RNA轉錄模板.52溴脫氧尿嘧啶標記分析顯示rcDNA在胞漿經逆轉錄合成,是核內病毒cccDNA擴增池的主要前體.鴨肝細胞外感染鴨乙型肝炎病毒(DHBV)證實,在病毒產生前的感染早期,核內就能檢測到50至100個拷貝cccDNA分子,說明核內cccDNA擴增池的形成不需要多輪感染.在感染細胞內,病毒的持續存在也可能依賴於轉錄活性cccDNA分子池的大小.Tuttleman等研究發現DHBV接種肝細胞原代培養后8~12 d ,細胞核內DHBV DNA分子增加超過100倍,胞內rcDNA,ssDNA水平則僅增加2~4倍.這種早期cccDNA分子擴增發生時,在培養細胞的上清液中尚不能檢測到完整的感染病毒顆粒.

乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸(HBV-DNA)

實驗的基礎上,專家提出在感染的早期階段細胞核內cccDNA合成的途徑為:病毒XX細胞后,在胞漿內脫殼,DNA的正鏈在DNA聚合酶作用下形成全長的rcDNA.rcDNA被轉運至核內構象發生改變形成cccDNA ,作為HBV部分基因的mRNA和前基因組RNA的合成模板.前基因組RNA在核內轉錄後轉運到胞漿,經組裝XX複合體內,複合體由病毒核心蛋白以及P蛋白組成.以前基因組RNA為模板通過逆轉錄合成HBVDNA負鏈.前基因組降解后,剩下負鏈DNA作為正鏈DNA的合成模板.新合成的雙鏈中的正鏈大多不完整.包含完整或部分正鏈的核衣殼核心包裝進病毒包膜運出細胞成為成熟的病毒體,但也可在胞漿內脫殼形成rcDNA被轉運至核內以補充cccDNA的量.一個感染病毒體在感染肝細胞后只產生一個cccDNA分子,但在處於穩定感染的每個肝臟細胞內大約有50~100個cccDNA拷貝,其原因就是rcDNA又在胞內轉換成cccDNA.

複製過程

  不同於一個真正的生物體,病毒並不通過生長和分裂等方式繁殖自身,而是像鑄造機器零件一樣,按照一定的模具拷貝出來的。病毒DNA中包含有一些程序,指導病毒的遺傳物質和其它一些結構蛋白組分增殖。另外,病毒DNA中還包含有一些信息,使得單一組分能夠在細胞因子的幫助下,自發組裝成新的病毒顆粒。

HBV-DNA結構示意圖

  在醫學上,病毒的繁殖被稱之為「複製」,在複製的過程中,有兩個很重要的因素:一個是催化劑,另一個是模板。沒有這兩個因素,乙肝病毒就不能複製。乙肝病毒複製的「催化劑」就是乙肝病毒DNA(即HBV-DNA)聚合酶。沒有這種聚合酶的作用,乙肝病毒的複製就會停止。   乙肝病毒的基因組(HBV-DNA)是由兩條螺旋的DNA 鏈圍成的一個環形結構。其中一條較長負鏈已經形成完整的環狀;另一條長度較短的正鏈,呈半環狀。在感染肝細胞之後,這條半環狀的DNA鏈就會以負鏈為模板,在催化劑──HBV-DNA聚合酶的作用下延長,最終形成完整的環狀。這時的乙肝病毒基因組就形成了一個完全環狀的雙股DNA。把這種DNA稱做共價閉合環狀DNA(即cccDNA),可以把它看作是病毒複製的原始模板。模板形成后,病毒基因會以其中的一條cccDNA為模板,利用肝細胞基因中的酶和DNA 聚合酶的「催化」,一段基因又一段基因地複製,形成負鏈和正鏈。最後再裝配到一起形成新的HBV-DNA顆粒。

基本參數

  通常低於10的3次方,就結論陰性報告上寫陰性,或「<10的3次方」。HBV-DNA檢查非常靈敏,在同一數量級變化通常不能說明病毒變化,例如2X10的5次方和5X10的5次方很可能就是沒有變化,但2X10的5次方和2X10的4次方,就有變化了。[6]   需要指出的是,HBV-DNA陽性的乙肝攜帶者未必需要治療,還要結合轉氨酶(ALT)水平。一般來說,只有當轉氨酶大於正常值的2倍時,才應考慮治療;HBV-DNA值的多少和肝損傷的程度沒有直接的關係。乙肝大三陽攜帶者的HBV-DNA一般都比較高,但肝損傷未必就嚴重,因為乙肝病毒本身並不直接傷害肝細胞。

HBV-DNA定量檢查

  HBV-DNA定量檢查就是檢驗乙肝病毒在血液中的含量。通過乙肝病毒含量的檢測,可以了解患者體內的病毒含量,病情發展狀況,對患者的治療有很好的指導作用。   HBV-DNA定量檢查的正常值是1000cps/ml。[7]   當HBV-DNA定量檢查值小於1000cps/ml時,表明體內HBV-DNA為陰性,傳染力弱。   當HBV-DNA定量檢查值大於1000cps/ml時,表明體內HBV-DNA為陽性,病毒仍然較多,傳染力強。

檢測意義

  乙肝病毒檢測有兩個意義,一個是乙肝病毒DNA定性檢測,一個是定量檢測,另外還有一個是基因分析和耐葯的變異檢測,定性檢測比定量要求高,這點在國內是比較忽視的。   還有定量的問題,強調用干擾素核苷類似物進行抗病毒治療,無論是哪一種藥物的治療,乙型肝炎病毒的滴度和陰轉都是考核抗病毒治療的硬性指標,所以這項檢測指標是非常重要的,而且在很多藥物治療過程中,乙肝病毒DNA下降的速度和幅度對於抗病毒治療應達的療效具有重要的預測價值,所以是非常重要的。第三點要對乙肝病毒進行基因分形和耐葯變異問題測定,比如說有的病人服藥之後從陰性轉成陽性,還有乙肝病毒DNA的升高,這樣的病人要充分重視是否產生了耐葯變異,這個檢測對醫生更換藥物或者更換治療方案是非常有關係的。

如何看HBV-DNA檢測報告

  2)HBV-DNA的意義:主要是定性和定量。   3)定性,即確定是陰性還是陽性。乙肝病毒DNA的正常值為陰性,即乙肝病毒DNA<1x10的3次方拷貝/ml 。定性測得的陽性通常說明病毒容易傳染給他人,陰性說明不容易傳給他人。對於乙肝大三陽來說,由於乙肝病毒e抗原(HBeAg)是陽性,所以乙肝病毒-DNA也是陽性的,表示乙肝病毒-DNA>1 x 10的3次方拷貝/ml ,這時體內的乙肝病毒複製活躍。   4)定量,即檢測乙肝病毒在血液中的含量。定量檢測結果主要是對抗病毒治療提供檢測和療效參考。由於結果是數字的,而不是「高/低」、「陰/陽」、「正常/不正常」,所以看起來比較麻煩。確定正常值指標一定要知道所做實驗的參考範圍。參考範圍因檢測儀器、方法、試劑的不同而有差異。

HBV-DNA重要性

  HBV-DNA是判斷乙肝病毒有無複製的「金指標」   HBV-DNA稱為乙肝病毒脫氧核糖核酸。病毒從結構上分為兩類一類是RNA病毒(核糖核酸病毒),另一類是DNA病毒(脫氧核糖核酸病毒),乙肝病毒屬於後者。病毒與細菌不同,細菌體內含有兩種核酸(RNA和DNA),而病毒體內只含有一種核酸,或RNA或DNA。核酸是病毒的核心部分、病毒的基因都在這裡,沒有核酸,病毒就不能複製。因此,檢測HBV-DNA是判斷乙肝病毒有無複製的「金指標」。有人會問,檢測乙肝「乙肝兩對半」已能反映乙肝病毒有無複製、有無傳染性,為何還要檢測HBV-DNA呢?這是不是重複檢查,增加了病人的負擔? 可以肯定,檢測HBV-DNA是必需的,不是重複檢查,原因如下:   1.如果乙肝病人是「小三陽」,一般說這是乙肝病毒XX非複製狀態,傳染性消失或很低,病情也應當趨於穩定。但實際情況並非如此,有時病人的轉氨酶仍然反覆波動,甚至出現黃疽,這是怎麼回事?經檢測HBV-DNA發現其為陽性,可以肯定,病毒仍複製活躍、病情不穩定與乙肝病毒活躍有關。「小三陽」乙肝因其HBeAg陰性,被醫生稱為「HBeAg陰性肝炎」,是這由於病毒「變異」造成的,故也稱「異型乙肝炎」。對此型乙肝不能掉以輕心,病情可能更重。   2.在檢測病人「乙肝兩對半」時,僅發現其中1項陽性,如HBsAg陽性或單一的抗—HBc陽性,這並不能說明病人體內的病毒有無複製,必需檢測HBV-DNA,一旦陽性、就可肯定仍有病毒複製、也有傳染性。   3.有一些肝炎病人的「乙肝兩對半」5項全部陰性,甚至甲、丙、丁、成型肝炎病毒標誌物也是陰性,但病人的轉氨酶卻很高,有黃疽,肝功能損傷明顯、這是怎麼回事呢?通過測HBV-DNA后,可能發現為陽性,就此可斷定這種肝炎叫「慢性隱匿性乙肝」,在不明原因的肝炎中,此類型肝炎約占30一60%。   4.有的乙肝病人竟被檢測到抗一HBs,這是保護性抗體,它的陽性說明感染結束,但為什麼病人的病情依舊,並無好轉跡象?如HBV-DNA陽性,問題又解決了,這叫「抗—HBs陽性乙肝」,也是病毒變異惹的禍。

HBV-DNA檢查需要空腹

  HBV-DNA是乙肝病毒存在的直接證據,HBV-DNA檢查對於判斷乙肝傳染性強弱、乙肝病毒複製情況、乙肝抗病毒治療效果等都有十分重要的意義,因此,HBV-DNA檢查的應用越來越普遍,人們也越來越關注HBV-DNA檢查。   HBV-DNA檢查是不需要空腹的。但在觀察乙肝抗病毒治療效果時,除了檢查HBV-DNA,還需要檢查肝功能,檢查肝功能是必須空腹的,因為肝功能檢查多項內容測定值與飲食有一定關係,如飲酒易使某些血清酶值升高,進食油食物后可以使血脂增高等。因此,檢查HBV-DNA也得空腹進行。

HBV-DNA檢查費用

  HBV-DNA檢查費用不是統一的標準。由於HBV-DNA檢查費用受很多因素的影響,患者所進行檢測的醫院不同,HBV-DNA檢查多少錢也會有所不同。如果用進口試劑化驗定量大約需要100-200元,而國產的試劑化驗定量則更便宜。另外進行HBV-DNA定量檢測和HBV-DNA定性檢測的價格也是不相同的。再者,有的患者發現同一個城市不同的醫院進行HBV-DNA檢測的價錢有時候也是不一樣的。

結構特點

  HBV-DNA乙肝病毒基因組結構精密,功能齊全,最小的容量發揮高效的功能。其獨特的基因結構為小環狀、部分雙股的HBV-DNA,即乙型肝炎病毒基因組。

基本組成

  乙肝病毒有3200個核苷酸組成的,分為負鏈和正鏈,負鏈有4個開放閱讀框(ORF),分別稱為S區,X區,C區,P區。   S區:由S基因、PreS1和PreS2基因組成。編碼HBsAg、PreS1、PreS2。   C區:由前C和C基因組成。C基因編碼核心蛋白HBcAg。 Pre-C與C基因共同編碼Pre-C蛋白 。 Pre-C蛋白經切割加工后形成HBeAg   P區:編碼DNA多聚酶   X區:編碼HBx

HBV DNA正常值

  HBV DNA正常值[8]是<10的3次方(或<1.0e+003拷貝/ML是正常值,此值僅供參考,以檢測醫院數據為準)。

HBV DNA檢查注意事項

  首先,HBV DNA檢查的是乙肝病毒複製多少,DNA複製程度的大小並不代表肝臟實際損害的程度,DNA複製程度高,並非就代表損害嚴重。是否有損傷或損傷的程度請參考生化檢查結果或肝活檢的結果。   其次,HBV DNA檢查分為定性檢查和定量檢查。HBV-DNA定性檢查就是陰性或是陽性的結果。HBV DNA定量檢查就是明確的數值,一般來說將HBV DNA低於1000copies/ml確定為陰性,但是因為採用的儀器和試劑不同,應該根據HBV-DNA檢查化驗單提供的正常參考值的範圍來確定,而不能簡單地一概而論。   第三,HBV DNA檢查不需要空腹,也無特殊要求。   第四,HBV DNA定量檢查精度非常高,但是準確性較差,一般只能精確到一個數量級上。所以乙肝患者在進行檢查時,不能簡單地按照一次的檢查結果來判斷病情,而應該將結合其它檢查指標,綜合多次HBV DNA定量檢查結果進行判斷。   第五,目前主要採用HBV DNA定量檢查,但是只有大型醫院才具有檢查設備和技術,一些小的醫院並不具備這樣的條件的。乙肝檢查要盡量去大醫院檢查,不要圖便宜、圖快。

PCR法HBV-DNA檢測的臨床意義

實時熒光定量PCR檢測儀

  常規PCR法HBV-DNA檢測的臨床意義   常規PCR法HBV—DNA定量檢測獨特的診斷價值表現:   1、常規PCR法HBV-DNA檢測施治前進行病毒定量檢測,可以選擇針對性的藥品,避免盲目用藥。   2、常規PCR法HBV-DNA檢測施治后定量PCR可直接準確地測定體內病毒數量,有助於判斷治療乙肝的效果   3、常規PCR法HBV-DNA檢測妊娠前進行定量PCR測定,有助於選擇有益的妊娠機會。乙肝妊娠期的婦女進行定量PCR檢查,有助於使部分患者得到及時、正確的診斷。   PCR病毒實驗室的關鍵作用   PCR檢測技術隊軟硬環境要求條件相當嚴格,並不是一般的醫院都能開展的,開展「PCR」檢測必須具備以下條件:   A、必須擁有標準的的PCR熒光實驗室;   B、檢測設備必須符合標準PCR熒光實驗室設置要求;   C、必須通過國家臨床檢驗中心的驗收和認證;   D、檢測人員必須通過國家臨檢中心業務培訓並取得合格證書;   E、必須在無菌無塵環境下進行操作。

HBV-DNA定量數值的正確解讀

  HBV-DNA定量為4×10的5次方copies/ml,不能解釋為血液中每亳升含有乙肝病毒40萬個,拷貝數是利用DNA信號擴增技術,由電腦算出血液中乙肝病毒核酸的含量,拷貝數是一個分子生物定量單位,不是簡單的數量單位。拷貝數高,說明病毒核酸含量高。   由於肝臟組織中的乙肝病毒每時每刻釋放到血液中的數量都在變化之中,每天檢測血液中的乙肝病毒核酸含量都不相同,不能簡單用乙肝病毒核酸含量解釋乙肝治療效果。   另外乙肝病毒核酸的檢測靈敏性高,特異性強,實驗室及儀器設備要求較高,目前具備合格實驗條件的實驗室並不多,各實驗結果不統一,沒有可比性,這是在分析HBV-DNA定量結果時,必須加以考慮的問題。

HBV-DNA陽性的意義

  HBV-DNA主要是檢測血液中是否有乙肝病毒以及乙肝病毒的數量的。如果HBV-DNA陽性[9],表示血液中的乙肝病毒數量超過了HBV-DNA正常值1000copies/ml。   HBV-DNA是乙肝病毒複製的指標,陽性提示有乙肝病毒複製。HBV-DNA的含量高低,提示乙肝病毒複製是否活躍。目前實驗室檢測下限是500/ml。此項指標與乙肝五項,肝功能,肝膽脾B超,血常規等,作為乙肝患者和乙肝病毒攜帶者病情的主要參考指標,對於確定治療計劃以及評價療效,尤其是抗乙肝病毒治療,有重要意義。   HBV-DNA越高表示病毒複製越厲害,傳染性強。乙肝患者如果檢查出HBV-DNA陽性,應該進一步檢查肝功能、B超等。

HBV-DNA陽性該怎麼辦

  HBV-DNA定量檢測陽性說明體內存在病毒複製且傳染性相對強。這種情況下,不論是乙肝大三陽還是乙肝小三陽患者,此時都需要進行抗病毒治療。若乙肝患者肝功能正常,此時建議患者做肝穿刺檢查,結果提示肝臟有炎症時也要進行抗病毒治療,尤其是有肝癌家族史的患者,無論肝臟出現炎症,都需要進行治療。   乙肝患者如果檢查出HBV-DNA陽性,應該進一步檢查肝功能、B超等。肝功能是衡量乙肝患者病情輕重的指標,B超檢查結果可以看看該患者是否存在肝硬化跡象。如果HBV-DNA陽性患者的肝功能檢查異常或者B超檢查結果提示肝硬化,需要儘快進行治療,防止病情進一步惡化。

HBV-DNA與乙肝兩對半檢測區別

  HBV-DNA與乙肝兩對半檢查區別一:檢查對象不同   (1)HBV-DNA檢查主要是對乙肝病毒的脫氧核糖核酸進行定性定量檢查。HBV-DNA定性檢查是檢查HBV-DNA是陰性還是陽性,從而確定是否有感染性;HBV-DNA定量檢查是檢查患者帶有HBV-DNA的數量(病毒載量),從而判定感染性的高低。   (2)乙肝兩對半檢查主要是指通過對乙肝表面抗原(HBsAg)、表面抗體(抗HBs或HBsAb)、e抗原(HBeAg)、 e抗體(抗HBe或HBeAb)、核心抗體(抗HBc或HBcAb)這五項指標的檢測來檢查是否感染乙肝及感染的具體情況,區分大三陽、小三陽。   HBV-DNA與乙肝兩對半檢查區別二:臨床檢測意義不同   (1)HBV-DNA檢查對醫生的診斷和用藥非常重要,如果是陽性而且乙肝病毒載量很高,就須治療。有的人因病情反覆,可引起肝硬化;有的則因乙肝病毒DNA和人肝細胞的DNA發生整合,會促使癌變。因此HBV-DNA檢查做為臨床用藥指導意義重大。   (2)乙肝兩對半隻能反映體內抗原抗體的攜帶模式及在一定條件下機體的免疫情況,為乙肝病毒感染提供間接證據。乙肝兩對半的各項指標,具有的的臨床意義也不同。例如:HBsAg(+)是乙型肝炎病毒感染的指標;HBeAg(+)是乙肝病毒在體內複製(繁殖)的指標, 提示傳染性較強;抗-HBc(+)提示體內存在HBcAg,是既往或現症感染乙肝病毒的標誌。

HBV-DNA定量檢查結果分析

  1、如果HBV-DNA[10]定量檢測結果小於1.0e3cps/ml,體內乙肝病毒數量極少,一般的實驗室檢測不出來。如果乙肝患者的肝功能正常、沒有肝炎癥狀或者體征,可以暫時不用治療,但需要定期檢查肝功能、HBV-DNA等,發現病變及時治療。   2、如果HBV-DNA定量檢查結果大於1.0e3cps/ml,就說明患者體內有乙肝病毒,病毒複製活躍,有傳染性。HBV-DNA定量檢測值越大,體內病毒數量越多,病毒複製活躍。HBV-DNA定量檢查結果大於1.0e3cps/ml、肝功能正常的乙肝患者,從理論上說,應密切關注病情變化,一旦肝功能異常就要及時治療,否則對肝臟損傷很大。

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