尿素酶

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概述

  尿素酶是一種人和動物腸道及泌XX細菌感染中常見的酶,它既是人和動物中某些致病菌致病因子之一,又是某些氮源性腐敗物轉化所必須具備的酶之一. 它是人類首次獲得晶體並發現含有Ni離子的金屬酶〔7〕。   尿素酶又名脲酶,詳見百度百科「脲酶」詞條。

尿素酶的理化性狀

  Hp尿素酶除有尿素酶的一般理化性狀外,還有其獨特性. Hp尿素酶分子量為550KDa左右,直徑13nm,等電點5.99±0.03,最適溫度45℃,最適pH 8.2. Km值0.3mmol/L±0.1mmol/L,在飽和條件下純化的尿素酶活性為每毫克蛋白質每分鐘水解1100μmol±?200μmol尿素,較低Km值有助於Hp的尿素酶在尿素濃度較低的人胃環境中始終處於飽和狀態而發揮最大的功能. Hp尿素酶單體由A,B兩個亞單位組成,呈六聚體,A,B兩個亞單體的Mr分別為30000和64000左右,其比例為1∶1,而其他菌屬所含尿素酶則有三個亞單位組成. Hp的尿素酶量很大,占全菌蛋白的5%~10%. 尿素酶一般為胞質蛋白,而Hp具有大量高活性的胞外尿素酶,Hp產生的尿素酶活性相當於奇異變形桿菌的2倍,尿素酶陽性腸道菌的7倍,故尿素酶活性的測定可以作為Hp的快速診斷方法。

大豆粕中尿素酶的測定:

測定方法1

  方法名稱:尿素— 苯酚紅法(美國大豆協會)   1 原理   尿素酶活性是大豆餅粕類加工正確與否的標誌,它的活性的高低與大豆餅粕加工(熱)程度有直接關係,此方法是在指示劑苯酚磺存在的條件下,按尿素轉變成氨的方法定性測定豆粕中尿素酶的活性。   2 試劑   (1)0.1mol/L硫酸(將6ml濃硫酸緩緩注入1000ml水中)   (2)0.2mol/L氫氧化鈉:取0.8g氫氧化鈉加蒸餾水,溶解成100ml   (3)尿素— 苯酚紅別名:酚磺肽、酚紅)試劑:將 1.2g苯酚紅溶於30mL0.2mol/L氫氧化鈉溶液中,用蒸餾水稀釋至300mL;加入90g尿素並溶解之,用蒸餾水稀釋至 2L;加 70mL0.1mol/L硫酸;稀釋至3L。   注意:配好的溶液應具有明亮的琥珀色,若溶液轉變成桔紅色時,應滴加0.1mol/L硫酸,調至呈琥珀色,試劑最好在試驗前配製,現配現用。尿素—苯酚紅試劑有效期僅90天。   3.測定方法   (1)取粉碎好的豆粕,均勻地平鋪于培養皿中(注意鋪薄薄一層)。   (2)用滴管吸取尿素— 苯酚紅試劑,小自心滴在被測定的樣品中,將培養皿中豆粕全部浸濕。   (3)放置5分鐘后觀察結果:   ①沒有任何紅點出現,再放置25分鐘,若還無紅點出現,說明沒有尿素酶活性,是豆粕加工過熟了。   ②有少數紅點,為少量尿素酶活性,豆粕可用。   ③豆粕表面有25%的紅點覆蓋,有少量尿素酶活性,可用。   ④豆粕表面出現50%的紅點覆蓋,尿素酶活性大,應慎用。   ⑤豆粕表面的 75%一100%為紅點覆蓋,尿素酶活性很高,說明豆粕過生,無法使用

測定方法2

  名稱:酚紅指示劑   1、原理   酚紅指示劑在PH6.4—8.2時由黃變紅,大豆製品中所含的尿素酶,在室溫下可將尿素水解,產生氨,釋放的氨可使酚紅指示劑變紅,根據變紅時間長短來判斷尿素酶活性大小。   2、儀器和試劑   (1) 粉碎裝置:粉碎時應不產生強烈發熱(如研體球磨機)   (2) 天平:感量0.01g   (3) 試管:直徑1.8cm,長15cm   (4) 尿素:分析純   (5) 酚紅:分析純、0.1%乙醇(20%)溶液   3、測定步驟   將試樣研細,稱取0.02g試樣,稱准至0.01g重,轉入試管中,加入0.02g結晶尿素及兩滴酚紅指示劑,加20—30mL蒸餾水,搖動10s鍾。觀察溶液顏色,並記下呈粉紅色的時間。   4、尿素酶活性的測定結果表示:   (1)1分鐘內呈粉紅色為活性很強。   (2)1—5分鐘內呈粉紅色為活性強。   (3)5—15 分鐘內呈粉紅色為有點活性。   (4)15—30分鐘內呈粉紅色為沒有活性。   通常10分鐘以上不顯粉紅色或紅色的大豆製品,其尿素酶活性即可認為合格。