胰蛋白酶

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蛋白Trypsin (Parenzyme) 為蛋白酶的一種,EC3.4.21.4。在脊椎動物中,作為消化酶而起作用。在胰臟是作為酶的前體胰蛋白酶原而被合成的。作為胰液成分分泌,受腸激酶,或胰蛋白酶的限制分解成為活化胰蛋白酶,是肽鏈內切酶,它能把多肽鏈賴氨酸精氨酸殘基中的羧基切斷。它不僅起消化酶的作用,而且還能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前體,起活化作用。是特異性最強的蛋白酶,在決定蛋白質氨基酸排列中,它成為不可缺少的工具。

介紹

  牛的胰蛋白酶氨基酸殘基223個,分子量為23300,活性部位絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶。除存在於脊椎動物外,還存在於蠶、海盤車、蝲姑、放線菌等範圍廣泛的生物體中。另外與高等動物的血液凝固炎症等有關的凝血酶纖溶酶、舒血管素等蛋白酶在化學結構和特異性等方面與胰蛋白酶具有密切的關係,可以認為這些酶是從共同的祖先酶在進化過程中分化而來的。胰糜蛋白酶與彈性蛋白酶在結構和催化機制方面也具有密切關係,但其特異性則完全不同。   胰蛋白酶系自牛、羊或豬胰中提取的一種蛋白水解酶。中國藥品標準規定按乾燥品計算,每1mg 的效價不得少於2500單位。 由牛、羊、豬胰臟提取而得的一種肽鏈內切酶,只斷裂賴氨酸或精氨酸的羧基參與形成的肽鍵。白色或米黃色結晶性粉末。溶於水,不溶於乙醇、甘油、氯仿乙醚。分子量24 000,pI 10.5,最適pH值7.8~8.5左右。pH>9.0不可逆失活。Ca2+對酶活性有穩定作用;重金屬離子有機磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶抑製劑對其活性有強烈抑制臨床用於抗炎消腫,工業上用於皮革製造、生絲處理食品加工等。

作用與用途

  本品為蛋白質水解酶,能選擇地水解蛋白質中由賴氨酸或精氨酸的羧基所構成的肽鏈,能消化溶解變性蛋質,對未變性的蛋白質無作用,因此,能使膿、痰液、血凝塊等分解、變稀,易於引流排除,加速創面凈化,促進肉芽組織新生,此外還有抗炎症作用。臨床上用於膿胸血胸外科炎症、潰瘍創傷損傷、瘺管等所產生的局部水腫血腫膿腫等。噴霧吸入,用於呼吸道疾病。也可用於治療毒蛇咬傷。還常用於動物細胞培養前對組織的處理。

劑量與用法

  肌內注XX,1 000~2 000U或5 000U用生理鹽水或注XX用水溶解,1次/日。治毒蛇咬傷,取本品2 000U,1~3支,加0.25%~0.5%鹽酸普魯卡因液(或注XX用水)4ml~20ml溶解,以牙痕為中心,在傷口周圍作浸潤注XX。或在腫脹部位上方作環形封閉1~2次,如病情需要可重複使用

副作用

  1 寒戰發熱頭痛頭暈胸痛腹痛腹瀉等。 2 不可用於急性炎症出血空腔中。 3 肝、腎損傷、血凝異常和有出血傾向忌用

細胞培養用胰蛋白酶溶液的配製與消毒

  胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應不一樣。胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關,在 pH 為 8.0 、溫度為 37℃ 時,胰酶溶液的作用能力最強。使用胰酶時,應把握好濃度、溫度和時間,以免消化過度造成細胞損傷。因 Ca2+ 、 Mg2+ 和血清、蛋白質可降低胰酶的活性,所以配製胰酶溶液時應選用不含 Ca2+ 、 Mg2+ 的 BSS ,如: D-Hanks 液。終止消化時,可用含有血清培養液或者胰酶抑製劑終止胰酶對細胞的作用。   1. 稱取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液濃度為 0.25 %,用電子天平準確稱取粉劑溶入小燒杯中的雙蒸水(若用雙蒸水需要調 PH 到 7.2 左右)或 PBS ( D-hanks )液中。攪拌混勻,置於 4℃ 內過夜。   2. 用注XX濾器抽濾消毒:配好的胰酶溶液要在超凈台內用注XX濾器( 0.22 微米微孔濾膜)抽濾除菌。然後分裝成小瓶于 -20℃ 保存以備使用。