心肌酶譜

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簡介

  對心肌酶檢查,檢查心肌酶主要是確定心肌缺血壞死細胞膜通透性。   1.血清總論:P232   LDH、AST、CK及其同I酶,α-HBD

一、血清酶的來源和分類:

  (一)根據來源及血漿中發揮作用:   1.血漿持異酶:主要在血漿中發揮催化作用的酶類   eg:凝血酶原凝血因子(X、ⅫI、Ⅶ)纖溶酶原,前激肽釋放酶   假性膽鹼脂酶:銅藍蛋白,脂蛋白脂肪酶,腎素   假性膽鹼脂酶:水解可能幹擾乙酰膽鹼脂酶活性的一些化合物   銅藍蛋白:是一種氧化酶,與Fe蛋白,動員有關   脂蛋白脂肪酶:參與脂蛋白中脂肪的水解和儲存   2.外分泌酶   eg:唾液和胰澱粉酶,胰脂肪酶,蛋白酶胰蛋白酶攝護腺酸性磷酸酶等。   在血漿中很少發揮催化作用   其濃度與其分泌腺體的功能有關   3.細胞酶:存在於各細胞和組織中進行物質代謝的酶類   在血液中無重要的催化作用   (1)一般代謝酶:無器官特異性   (2)組織專一性酶:OCT、SDH、ADH主要存在於肝。其活性能較特異地反映肝cell的病變。   (二)根據酶促反應性質可將酶分為六類:   1.氧化還原酶類:催化底物進行氧化還原反應。eg:LDH   CHO CHO   C=0+NADH+H+ LDH CH-OH+NAD+   COOH COOH   丙酮酸 乳酸   eg:LDH琥珀酸脫氫酶,細胞色素氧化酶過氧化物酶   2.轉移酶類:催化底物之間進行某些基團的轉移或交換的酶類   COOH CH3 COOH CH3   (CH2)2 +HC-NH2 ALT (CH2)2 + C=0   C=0 COOH HC-NH2 COOH   COOH COOH   α-酮戊二酸 丙氨酸 谷氨酸 丙酮酸   eg:轉氨酶、已糖激酶磷酸化酶   3.水解酶:催化底物之間發生水解反應的酶類   eg:澱粉酶、蛋白酶、脂肪酶、磷酸酶   ALP   對-硝基苯磷酸鹽<IMG height=10 src="http://www.clinet.com.cn/images/image005.gif" width=50 v:shapes="_x0000_s1026">對-硝基苯酚+磷酸鹽   水解   4.裂解酶類:催化底物移去一個基因而留下雙鍵的反應或逆反應的酶類。   eg:碳酸酐酶,醛縮酶   5.異構酶類:催化各種同分異構體之間互相轉化的酶類   eg:磷酸已糖激酶,消旋酶   磷酸已糖激酶   6-磷酸葡萄糖<IMG height=10 src="http://www.clinet.com.cn/images/image005.gif" width=50 v:shapes="_x0000_s1026">6-磷酸果糖   6.合成酶類(連接酶類):催化兩分子底物合成-分子的化合物,同時必須偶聯有ATP磷酸鍵斷裂

二、血清酶的命名:

  1.習慣命名法:根據酶來源,催化反應性質及底物來命名。   底物:澱粉酶,蛋白酶   性質:脫氫酶、轉移酶   來源:胰澱粉酶、胃蛋白酶   底物+性質:穀草轉氨酶   2.系統命名法:酶反應底物、性質均要列出,各底物間以「:」隔開   編號:(1)1為氧化還原酶類   2為轉移酶類   3為水解酶類   4為裂解酶   (2)反應作用的位置,即可用於哪個基因   1.1 -CH-OH   1.2 -C=0   1.3 -C=CH   1.4 -C=NH   1.5 -CH-NH2   1.6 NADH、NADPH   (3)   1.1.1 氯化還原酶 CH-OH 受體:NAD+ NADP-   1.1.2 氯化還原酶 CH-OH 受體:細胞色素   1.1.3 氯化還原酶 CH-OH 受體:分子氧

三、血清酶的去路:

  (一)血清酶的排泄:P234   1.尿路:是血清中低分子量酶類主要去路   2.膽汁不是血清酶排泄途徑   (二)肝或網狀內皮系統對血清酶的清除:   肝臟對以酶原形式存在的酶類有消除作用   (三)酶蛋白在血管內的失活和分解:   (四)轉入其它體液

四、酶的活性單位及生理差異:

  (一)酶的活性單位:在規定條件,每分鐘催化1umol的基質發生轉化所需要的酶量。   規定條件包括:溫度、PH、緩衝系統、基質濃度及輔助因素   (二)酶的單位計算   1.根據標準計算:   (U/L)酶活力單位=A樣品/A標準×C標準×Vt/Vs×1/t×1000   總體積-樣品+基質   2.根據反應底物的消光係數:   酶活力=A樣品/ξd×Vt/Vs×1/t×1000   消光係數 比色杯厚度   (三)血清酶的生理差異:   1.性別:男>女   2.年齡兒童 磷酸酶>成人 嬰兒 LDH 2倍成人   3.進食:對酶活力本身無影響,但可影響比色時的濁度   4.活動:   5.妊娠:ALT、LDH、ALP↑

五、疾病時血清酶改變的機制:

  (一)合成異常:P238   1.合成減少   2.合成增加   (二)酶從損傷細胞中釋放增加:   是疾病時大多數血清酶↑的主要機制   (三)其它機制:   腎衰→尿少→ 血澱粉酶↑   藥物毒物可作為酶的抑製劑   2.AST的測定:   AST 穀草轉氨酶(GOT)   天門冬氨酸氨基移換酶   一、AST分佈:   廣泛分佈於人體各組織、器官中,主要在心、肝、骨骼肌、腎、胰、脾、肺、RBC中。其中以心肌cell含量最豐富。   主要存在線粒體中(M-AST)。胞漿中(C-AST)僅占12%,是可溶性的正常血清中AST很少,只有上述組織發生病變   時,才釋放入血。

法學介紹

  (一)賴氏比色法:<實驗>P115

心肌酶檢測儀

[1] 1.原理:   COOH COOH COOH COOH   (CH2)2 + CH2 AST (CH2)2 + CH2   C=O HC-NH2 37℃ HC-NH2 C=0   COOH COOH COOH COOH   酮戊二酸 天門冬氨酸 谷氨酸 草酰乙酸   COOH CH3   CH2 檸檬酸苯胺 C=0+CO2   C=0 脫羧 COOH   COOH   丙酮酸   CH3   C=0 + →丙酮酸-2.4- = +H2O   COOH 硝基苯腙   2.4-二硝基苯肼 酸性,草黃色,加鹼,棕紅色   與標準濃度丙酮酸生成的苯腙比色(505nm)   2.正常參考值:8-28u   3.注意事項   (1)溶血標本不能用於AST測定,因為RBC中AST是血清10倍。   (2)M-AST、C-AST理化性質,Ag性均不同,由不同基因控制,但催化相同反應,是同I酶   (3)賴氏比色法簡易性,相對準確性,所以是普及的原因   (4)難以確定在酶反應期內,產物的生成與時間成正比。   草酰乙酸是AST競爭抑製劑,隨反應進程,產物,酶反應不斷。   (5)顯色反應及底物濃度問題。   酮戊二酸也可與2.4-二硝基苯肼反應,產生另一棕色苯腙,使AST測定假陽性增高。   為了減少其干擾,波長選在490-530nm,此時丙酮酸為-酮戊二酸2倍   2.4-二硝基苯肼在鹼性溶液中也可呈色,使吸光度偽性增高。   (6)A、偶聯轉氨作用:   ALT   丙酮酸+谷氨酸<IMG height=10 src="http://www.clinet.com.cn/images/image005.gif" width=50 v:shapes="_x0000_s1026">丙氨酸   所以肝疾病AST、ALT同時,使丙酮酸消耗,AST測定結果減低。   B、產物旁路   乳酸   LDH ↑NADH+H+   丙酮酸   ↑   α-酮戊二酸+天門冬aa AST 草酰乙酸+谷aa.   ↓MDH+NADH+H+   蘋果酸   所以受LDH、MDH干擾,使AST測定結果減低   (二)酶偶聯一些外連續監測法:   1.原理:L-天門冬aa.+α-酮戊二酸 AST 草酰乙酸+谷aa.   草酰乙酸+NADH+H+ MDH L-蘋果酸+NAD+   340nm   吸光度下降值,計算AST活力   2.參考值:男<40u/L 37℃   女<35u/L 37℃   3.注意事項:   (1)采血后立即分離血清,避血溶血   血清與血塊不可長時間設置在一起   (2)血清,室溫4-8h,2-6℃ 7d -20℃ 8月 活力不變   (3)抗凝劑血漿:   EDTA、2Na,肝素對AST無抑製作用   不能用草酸鹽抗凝劑,因為可抑制AST活性   (4)AST濃度過高,稀釋重做。   (5)不存在偶聯轉氨作用和產物旁路問題   (6)不存在 酮戊二酸干擾,可適當提高底物濃度使反應完全   (7)底物中存在谷氨酸脫氫酶(GLDH)   α-酮戊二酸+NADH+H++NH3 GLDH 谷aa.+NAD++H2O   消耗NADH+H+,使結果偽性增高。   (8)轎清中丙酮酸LDH   丙酮酸+NADH+H+ LDH 乳酸+HAD+   消耗NDAH+H+,使結果偏高   (9)在指示酶作用有,草酰乙酸可自動脫羧生成丙酮酸,使結果偏低。應加LDH,使之成為乳酸,從而更加准   確反映AST活力。   所以MDH、LDH共同作為指示酶   三、臨床意義:   1.AST在心肌中含量最多,所以在急性心梗時6-12h↑,48h達高峰,3-5d恢復正常   2.急性肝炎手術后,藥物中毒,AST明顯↑   肝Ca、慢性肝病肌炎,AST中度   肌炎,胸膜炎腎炎,AST輕度   3.急性肝炎,AST,ALT同時↑,可達正常值10-30倍,黃疸前期就已↑,有助於臨床早期診斷。   3.AST同I 酶:   <黃>血清酶測定時診斷心梗的意義:   心肌C、肝C出現實質性損害 M-AST C-AST↑   M-AST↑對肝病預後有一定診斷意義   心梗M-AST↑ 所以M-AST越↑,心梗併發心衰發病率、死亡率越↑,尤其推測死亡率方面意義更大。   4.血清乳酸脫氫酶的測定: 原理 PH對其影響    LDH 糖酵解酶,氧化還原反應   有五種同I酶LDH1-LDH5   一、LDH分佈和特點:   廣泛分佈,主要在腎,其次心,骨骼肌,其它肝、脾、胰、肺,上述組織病變,血清中LDH。主要催化以下反應:   L-乳酸+NAD+ 丙酮酸+NADH+H+   PH鹼 正反應(L-P)   PH中性 逆反應(P-L)   二、方法學   (一)比色法:<實驗>P122   1.原理:L-乳酸+NAD+ LDH 丙酮酸+NADH+H+   PH8.8   丙酮酸+2.4-二硝基苯肼 → 丙酮酸-2.4-二硝基苯腙   酸 草黃色   加NaOH 棕紅色   顏色越深,酶活力越大   2.參考值:225-540u/dL   3.注意事項:產物生成量與反應時間不成比例   (1)標本嚴禁溶血 因為RBC內LDH活力是血清內的100倍。   (2)LDH受重金屬鹽、EDTA、草酸鹽的抑制。最好用血清標本   (3)血清標本2-6 數天,室溫48h   (4)準確性和重複性在酶學檢驗中最差,因為五種同I酶與底物結合能力不同,最適反應條件不同,在病理   LDH組成差異大,所以很難找出LDH最適反應條件。eg:心梗LDH1↑,肝病LDH5↑   (5)結果>2500u/dL,將標本稀釋重做。   (二)連續監測法(酶法):<實驗>P120   1.原理:L-乳酸+NAD+ PH8.8-9.8 丙酮酸+NADH+H+   逆反應比正反應速度快2-3倍 所以反應偏向左側,多用P-L   LDH   丙酸酸+NADH+H+<IMG height=10 src="http://www.clinet.com.cn/images/image005.gif" width=50 v:shapes="_x0000_s1026">乳酸+NAD+   PH7.4   340nm處監測,吸光度下降幅度與LDH成正比。   2.參考值:240-460u/L 37℃   3.注意事項:   (1)逆反應優點:   a.試劑用量少,所需NAD+,只是L-P所用NADH+H+的3%,樣品少   b.單位時間內吸光度變化大,逆反應線性範圍較大,酶促反應速率比正反應快3倍,利於測定。 時間短   c.酶活力隨時間的線XX係較長   (2)正反應優點:   a.NADH+H+比NAD+穩定,價格低,易得到純品。   底物L-乳酸與逆反應底物丙酮酸穩定   b.L-乳酸對LDH的抑制低於丙酮酸對LDH的抑制   (3)連續監測法可利用正、逆反應,優於比色法。   (4)金屬離子的存在可以降低NAD+穩定性   試劑中可加入EDTA,使EDTA絡合金屬離子,增加NAD+穩定。   (5)NAD+不穩定,產生對LDH有抑製作用的物質。在鹼性液中比在酸性液中穩定,在Tris緩衝液中比在磷酸   鹽緩衝液中穩定。   (6)某些批號的NADH+H+還有LDH的物質,使用前檢查NADH+H+質量,NADH+H+溶於Tris緩衝液,分別在   260nm和340nm測吸光度,應<2.3,若>2.3,說明含有在260nm處有吸收峰的雜質,如NAD+、腺苷。   (7)α-酮丁酸羥基丙酮酸、乙醛酸可代替丙酮酸作底物。   (8)標本不能溶血   三、臨床意義:   1.LDH↑:急性心梗、骨骼肌損傷、某些肝炎、白血病肝硬化阻塞性黃疸惡性腫瘤。   2.心梗:12-24h,LDH↑,48-72h達高峰,1-2W后恢復正常   3.惡性腫瘤晚期LDH,惡性腫瘤引起的胸腹水中LDH↑   4.慢性腎小球腎炎、SLE、糖尿病腎病等病人中,尿LDH可達正常人3-6倍,尿中含多種抑制LDH活性物質,如尿素,   小分子肽類。   低PH值也可抑制LDH活性。   5.尿毒症患者LDH正常,透析后LDH↑,因為體內尿素較高

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