乳酸脫氫酶

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乳酸脫氫酶是一種糖酵解酶。乳酸脫氫酶存在於機體所有組織細胞的胞質內,其中以腎臟含量較高。乳酸脫氫酶是能催化乳酸脫氫生成丙酮酸的酶,幾乎存在於所有組織中。同功酶有五種形式,即LDH-1(H4)、LDH-2(H3M)、LDH-3(H2M2)、LDH-4(HM3)及LDH-5(M4),可用電泳方法將其分離。LDH同功酶的分佈有明顯的組織特異性,所以可以根據其組織特異性來協用診斷疾病。正常人血清中LDH2,〉LDH1。如有心肌酶釋放入血則LDH1〉LDH2,利用指標可以觀察診斷心肌疾病。

基本信息

  英文名稱: LDH(lactate dehydrogenase)   序列信息:1 gsgcnldsar frylmg   長度:16 aa{物種來源:Homo sapiens (human)}   正常範圍:血清135.0~215.0U/L;   尿 560~2050U/L;   腦脊液含量為血清的1/10。

臨床意義

  (1)急性心肌梗塞發作后,早期血清中LDH1和LDH2活性均升高,但LDH1增高更早,更明顯,導致LDH1/LDH2的比值升高。   (2)肝炎、急性肝細胞損傷骨骼肌損傷時LDH5都會升高。   (3)患活動性風濕心臟病、急XX毒性心肌炎溶血性貧血、腎壞死等病LDH1也可升高。

乳酸脫氫酶及其同工酶的簡介

  乳酸脫氫酶[1](LD)分子量為135~140KD,由兩種亞單位組成:H(表示heart)和M(表示muscle)。它們按不同的形式排列組合形成含4個亞基的5種同工酶,即:LD1(H4)、LD2(H3M1)、LD3(H2M2)、LD4(HM3)、LD5(M4)。   LD催化丙酮酸與乳酸之間還原與氧化反應,在鹼性條件下促進lactic acid向pyruvic acid方向的反應,而在中性條件下促進pyruvic acid向lactic acid的轉化(為逆反應)。LD是參與糖無氧酵解和糖異生的重要酶。   由於LD幾乎存在於所有體細胞中,而且在人體組織中的活性普遍很高,所以血清中LD的增高對任何單一組織或器官都是非特異的。在AMI時升高遲、達峰晚,故對早期診斷價值不大。由於半壽期長(10~163小時),多用於回顧性診斷,如對人院較晚的AMI病人、亞急性MI的診斷和病情監測醫學教育`網搜集整理。   LD在組織中的分佈特點是心、腎以LD1為主,LD2次之;肺以LD3.LD4為主;骨骼肌以LD5為主;肝以LD5為主,LD4次之。血清中LD含量的順序是LD2>LD1>LD3>LD4>LD5.

血清乳酸脫氫酶(LDH)同工酶測定及意義

  人組織中的乳酸脫氫酶(LDH)用電泳法可以分離出5種同工酶區帶,根據其

乳酸脫氫酶

電泳遷移率的快慢,依次命名為LDH1,LDH2,LDH3,LDH4,LDH5。不同組織的乳酸脫氫酶同工酶分佈不同,存在明顯的組織特異性,人心肌、腎和紅細胞中以LDH1和LDH2最多,骨骼肌和肝中以LDH4和LDH5最多,而肺、脾、胰、甲狀腺腎上腺淋巴結等組織中以LDH3最多。後來從XX和XX中發現了LDHx,其電泳遷移率介於LDH4和LDH5之間。LDH是由H(心肌型)和M(骨骼肌型)兩類亞基組成,分別形成LDH1(H4)、LDH2(H3M)、LDH3(H2M2)、LDH4(HM3)、LDH5(M4)。

正常參考值

  瓊脂糖電泳法:   LDH1(28.4±5.3)%;   LDH2(41.0±5.0)%;   LDH3(19.0±4.0)%;   LDH4(6.6±3.5)%;   LDH5(4.6±3.0)%。   醋酸纖維素薄膜法:   LDH1(25.32±2.62)%   LDH2(34.36±1.57)%   LDH3(21.86±1.38)%   LDH4(11.3±1.84)%   LDH5(7.97±1.59)%   聚丙烯酰胺法:   LDH1(26.9±0.4)%   LDH2(36.0±0.5)%   LDH3(21.9±0.4)%   LDH4(11.1±0.4)%   LDH5(4.1±0.3)%   總之,健康成人血清LDH同工酶有如下的規律:LDH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5。

臨床意義

  心肌細胞LD活性遠高於血清數百倍,尤以LDH1和LDH2含量最高。急性心肌梗塞時,血清LDH1和LDH2顯著升高,約95%的病例的血清LDH1和LDH2比值大於1,且LDH1升高早於LDH總活性升高。病毒性和風濕性心肌炎及克山病心肌損害等,病人的血清LDH同工酶的改變與心肌梗塞相似。LDH1/LDH2比值>1還見於溶血性貧血、惡性貧血、鐮形細胞性貧血、腎臟損傷腎皮質梗塞、心肌損傷性疾病、瓣膜病等。   腦幹含LDH1較高。頗腦損傷僅累及大腦半球時,只有血清同工酶譜的絕對值增高,而不影響同工酶的相互比值,如果累及腦幹時,病人血清LDH1的含量也增高。   急性心肌梗塞發病後12~24小時,血清LDH1業已升高。若同時測定LD總活性,可發現LDH1/總LDH的比值對急性心肌梗塞診斷的陽性率與可靠性優於單純測定LDH1或CK-MB。   胚胎細胞瘤病人的血清LDH1活性升高。   肝細胞損傷或壞死後,向血流釋入大量的LDH4和LDH5,致使血中LDH5/LDH4比值升高,故LDH5/LDH4>1可做為肝細胞損傷的指標。急性肝炎以LDH5明顯升高,LDH4不增,LDH5/LDH4>1為特徵;若血清LDH5持續升高或下降后再度升高,則可認為是慢性肝炎肝昏迷病人的血清LDH5.LDH4活性極高時,常示預后不良原發性肝癌以血清LDH4>LDH5較為常見。   腎皮質以LDH1和LDH2含量較高,腎髓質以LDH4和LDH5活性較強。患急性腎小管壞死慢性腎盂腎炎慢性腎小球腎炎以及腎移植排異時,血清LDH5均可增高。   肺含LDH3較多,肺部疾患時血清LDH3常可升高。肺梗塞時LDH3和LDH4相等,LDH1明顯下降;肺膿腫病人的血清LDH3.LDH4常與LDH5同時升高。   血清LD總活性升高而同工酶譜正常(LDH1/LDH2<1)的病例,臨床出現率依次為;心肺疾病、惡性腫瘤骨折中樞神經系統疾患、炎症肝硬變傳染性單核細胞增多症、甲狀腺機能低下、尿毒症組織壞死病毒血症腸梗阻等。   肌營養不良病人肌肉中LDH1.LDH2明顯增高,LDH5顯著下降;而血清則相反,LDH1.LDH2明顯減少,LDH4.LDH5顯著,表明血清LDH同工酶主要來自肌肉組織。煤礦、鎢礦矽肺病人的血清LDH1.LDH2下降,LDH4.LDH5升高。   (4)惡XX變時LDH3常增高。

乳酸脫氫酶高的原因

乳酸脫氫酶偏高的原因

[2]  至於乳酸脫氫酶高的原因,有以下方面:   1.當乙肝病毒攜帶者病情惡化成乙肝患者時,部分肝細胞受損,血清中LDH4和LDH5含量就會有不同程度的增高。   2.乙肝治療方法特別是是用藥不當,長期服用同一種藥物時造成腎毒現象的產生。當腎毒現象出現時,血清中乳酸脫氫酶含量會迅速升高。   3.乙肝不進行合適積極的治療,發展到一定程度時會造成肝臟代謝嚴重異常,導致腎臟功能衰竭,從而也會引起乳酸脫氫酶含量升高。   4.肺梗塞、惡性貧血、休克及腫瘤轉移所致的胸腹水時,會引起乳酸脫氫酶的偏高[3]

乳酸脫氫酶偏低的原因

  乳酸脫氫酶存在於機體所有組織細胞的胞質內,其中以腎臟含量較高。血清乳酸脫氫酶正常範圍是100~300U/L,當出現乳酸脫氫酶偏低時,常見原因如下。   乳酸脫氫酶偏低的原因1:檢查過程中出現誤差;   乳酸脫氫酶偏低的原因2:內分泌失調;   乳酸脫氫酶偏低的原因3:過於勞累、睡眠不好、心情不好等。   總之,乳酸脫氫酶偏低一般不是很嚴重,經過調理即可恢復。但如果出現乳酸脫氫酶偏高就要引起重視了。因為肺梗塞、惡性貧血、休克及腫瘤轉移所致的胸腹水時,會引起乳酸脫氫酶的偏高。[4]

乳酸脫氫酶(LDH)實驗

概述

  乳酸脫氫酶(LDH)是催化乳酸和丙酮相互轉化的同工酶,屬於氫轉移酶。該酶存在於所有動物的組織中,在肝臟中活性最高,其次為心臟、骨骼肌、腎臟,在腫瘤組織及白血病細胞中也能檢測到。在大多數動物組織中,它是由兩種肽鏈按一定比例組成的5種四聚體。它的每條肽鏈各由一個基因編碼,經轉錄、翻譯、修飾加工等過程,最後成為有生物學活性的物質。不同的動物,不同的組織或器官在不同的發育階段或不同的生活周期均有其特異性的同工酶酶譜。自然界中存在L和D兩種乳酸脫氫酶[5]

實驗原理

  用純化的抗體包被微孔板,製成固相載體,往包被抗D-LDH抗體的微孔中依次加入標本或標準品、生物素化的抗D-LDH抗體、HRP標記的親和素,經過徹底洗滌後用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的D-LDH呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度

試劑盒組成及試劑配製

  1. 酶聯板(Assay plate ):一塊(96孔)。   2. 標準品(Standard):2瓶(凍干品)。   3. 樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。   4. 生物素標記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。   5. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。   6. 生物素標記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)   7. 辣根過氧化物酶標記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)   8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。   9. 濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。   10. 終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

需要而未提供的試劑和器材

  1. 標準規格酶標儀   2. 高速離心機   3. 電熱恆溫培養箱   4. 乾淨的試管和Eppendof管   5. 系列可調節移液器及吸頭,一次檢測樣品較多時,最好用多通道移液器   6. 蒸餾水,容量瓶等

操作步驟

  實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測範圍。   1. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加於酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。   為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。   2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配製,輕輕混勻,在使用前一小時內配製),37℃,60分鐘。   3. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。   4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。   5. 溫育60分鐘后,棄去孔內液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。   6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。   7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到后應儘快加入終止液。   8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

計算

  以標準物的濃度為橫坐標(對數坐標),OD值為縱坐標(普通坐標),在半對數坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

注意事項

  1. 當混合蛋白溶液時應盡量輕緩,避免起泡。   2. 洗滌過程非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。   3. 一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。   4. 請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。   5. 如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請最後乘以稀釋倍數。   6. 在配製標準品、檢測溶液工作液時,請以相應的稀釋液配製,不能混淆。   7. 底物請避光保存。   8. 不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。

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