免疫組織化學技術

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發展簡史

  免疫熒光組織化學是現代生物學和醫學中廣泛應用的技術之一,是由Coons和他的同事(1941)建立,免疫熒光技術與形態學技術相結合發展成免疫熒光細胞(或組織)化學。它與葡萄球菌A蛋白(SPA)、生物素與卵白素、植物血凝素(ConA等)相結合拓寬了領域;與激光技術、電子電腦,掃描電視和雙光子顯微鏡等技術結合發展為定量免疫熒光組織化學技術;熒光激活細胞分類器Fluorescin activated cell sorter(FACS)的應用,激光共聚焦顯微鏡的問世,使免疫熒光細胞技術發展到更高的階段,開創了免疫熒光技術的新領域。細胞顯微分光光度計與圖像分析儀的結合使免疫熒光組織化學的定量檢測更加準確。80年代到90年代相繼又有新的熒光素出現如R-藻紅朊、B-藻紅朊、C-藻青蛋白、cy2、cy3、cy5和cy7等均在流式細胞儀和激光共聚焦顯微鏡中廣泛應用。   由於免疫熒光組織化學的特異性,快速性和在細胞水平定位的準確性,已在免疫學生物學病理學腫瘤學以及臨床檢驗等許多方面得到廣泛應用,日益發揮重要作用。[1]

現狀與展望

  免疫熒光組織化學技術經過半個多世紀的不斷改進和創新,已成為現代研究生物和醫學的重要手段之一。由於免疫熒光技術與形態、機能相結合不斷完善和發展,尤其是合成了多種新熒光素與抗體容易結合,且結合物穩定。可以和FITC結合進行免疫熒光組織化學雙標記或三標記。至今,它已和親合化學技術如SPA、Biotin以及avidin、ConA相結合,應用領域也日益擴大,又與現代的電子電腦、掃描電鏡技術、共聚焦顯微鏡、熒光激活細胞分類器(FACS)以及數碼相機攝影技術的應用,使得快速性、簡便性有了更大的提高,使得定量更加準確。90年代又開展了熒光原位末端標記和熒光原位雜交技術,使得應用範圍更廣。   雖然免疫組織化學技術有了很大的發展,如免疫金銀法、免疫膠體金法、SP、Evision二步法和CSA法,但由於它有自己獨特的優點:特異性強,定位準確、簡便、快速、鮮明,在許多領域中仍佔有不可取代的地位。如腎活檢皮膚活檢中IgG、IgM、IgA、C3等檢測,自身抗體的檢測,傳染病的快速診斷單克隆抗體的篩選及鑒定等。隨著科學技術地不斷發展,免疫熒光組織化學技術已經廣泛應用於生命科學的各個領域,放XX出更加五彩繽紛的熒光。   參考文獻   (1)Akivoshi Kawamura, JR. Fluorescent antibody techniques and their application. University of Tokyo Press. 1969.   (2)王伯沄. 免疫熒光組織化學和熒光組織化學技術. 第四軍醫大學科技資料增刊, 1974; 2: 5-30.   (3)Huang SN. Application of immunofluorescent staining on paraffin section improved by trypsin digestion. Lab Invest, 1976; 35: 383.   (4)Wick G, Traill KN, Schouesten K. Immunofluorescence Technology, Selected Theoretical and Clinical Aspects. Elseries Biomedical press. Amsterdom, 1982: P27~36, P181, P229~262,P317~323.   (5)Akiyoshi Kawamura Jr. Fluorescent antibody Technique and Their Applications. Second Edition University of Tokyo Press, Tokyo, 1977; 79: P141~281.   (6)蔡文琴, 王伯沄主編. 實用免疫細胞化學. 成都:四川科技出版社 1990,P968-977.   (7)李成文. 現代免疫化學技術. 上海: 上海科技出版社 1992;P97-100.   (8)Mahmudi-A3er-s, Lacy-P, Bablit2-B, Mogbel-R. Inhibition of nonspecific binding of fluorescent- labelled antibodies to human eosinophils. J Immunol-Methods. 1998; 227(1-2): 113-119.   (9)Magro-C-M, Cronison-AN. The immunofluorescent profile of dermatomyositis: a comparative study with lupus erythermatosus. J Cutan Pathol. 1997; 24(9): 543-552.   (10)Bausch-SB. A method for triple fluorescence labeling with vicia villosa agglutinin, an anti-parvalubumin antibody and an anti-G-Protein-coupled receptor antibody. Brain Res Brain Prtoc. 1998; 2(4): 286-298.   (11)Gregoni Weber, Jameson-DM. 1916-1917 A fluorescent life time. Biophys J. 1998; 75 (1): 419-422.   (12)Savige JA, Paspalians B, Silvestrini R, et al. A review of immunofluorescent patterns associated with antineutrophil cytoplasmic antibodies (ANCA) and their differentiation from other antibodies. J Clin Pathol. 1998; 51(18): 568-571.   (13)Ballou B, Fisher GW, Deng JS, et al. Cyanine fluorochenome-labeded antibodies in vivo: assessment of tumor imaging using Cy3, Cy5, Cy5.5 and Cy7. Cancer Detect Prev. 1998; 22 (3): 251-257.   (14)Gruber HJ, Hahn CD, Kada G, et al. A anomalous floworescence enhancement of Cy3 and Cy3.5 versus anomalous fluorescemce loss of Cy5 and Cy7 upon covalent linking to IgG and noncovalent binding to avidin. Bioconjug Chem. 2000; 11(5): 696-704.   (15)Southweel BR, Fumess JB. Immunohistochemical demonstration of the NKCD tachykin in receptor on muscle and epithelia in guinea pig intestine. 2001; 120(5): 1140-1151.   (16)Arseniev L, Pickerd N, Goudeva L, et al. Compasative evaluation of commonly used clone and fluorochrome conjugates of monoclonal antibodies for CD34 antigen detection. J Hematother Stem Cell Res. 1999; 8(5): 547-559.   (17)O'Brjen TE, Metheney CD, Polansky JR. Immunoflnorescence method for quantity the trabecular meshwork qlncocorticoid responsee (TIGR) protein in trabecular meshwork and schlemm's canal cells. Curr Eye Res. 1999; 19(6): 517.   (18)Huang MC, Kabo O, Tajika Y, et al. Detection of mammosomatotrophs in paraffin embed allowfullscreen='true'ded specimens of various pituitary adenomas. Chung Hua Hsssueh Tsa Chih (Taipei). 1999; 62(12): 845-851.   (19)王伯沄, 李玉松, 黃高陞, 張遠強主編. 病理學技術. 北京: 人民衛生出版社出版; 2000年6月 P380-396.[2]

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