有健康網»健康知識問答 科室 生活保健 存档 1

通心絡超微粉對大鼠絡脈瘀阻的防治效應研究

来源:www.uuuwell.com  2013-6-9 04:08

   
jingjingboy
2013-6-9 04:08:01
   摘要
      目的 在大鼠內皮損傷的基礎上,聯合脂多糖(LPS)和角叉菜膠(Ca)造成大鼠體內血栓形成,建立大鼠絡脈瘀阻病癥結合的動物模型,在此基礎上觀察通心絡超微粉對大鼠絡脈瘀阻的防治效應
   
      方法 將雄性SD大鼠隨機分為對照組、模型組和通心絡組。給予模型組大鼠持續4周蛋氨酸灌胃,引起高同型半胱氨酸血症,造成血管內皮損傷。通心絡組于蛋氨酸灌胃第3周開始加服臨床等效量通心絡,持續7天。予以對照組等量純水灌胃4周。4周后給予模型組和通心絡組大鼠腹腔注XXCa,16 h后再腹腔注XXLPS,對照組同步腹腔注XX生理鹽水對照處理,24 h后結束實驗
   
      結果 ① 與正常組比較,模型組大鼠血小板計數顯著減少;在注XXCa前, 活化部分凝血活酶時間(APTT)顯著縮短,而在注XXLPS 20 h后,APTT顯著延長,纖維蛋白(Fg)含量顯著減少;鏡下可見腸系膜微循環障礙,提示血管內皮功能受損,並且體內廣泛微血栓形成,絡脈瘀阻模型複製成功。② 通心絡組大鼠血小板計數顯著高於模型組;在注XXCa前, 通心絡組與對照組比較,APTT顯著延長,而Fg含量明顯減小,在注XXLPS 20 h后,APTT與對照組比較無顯著差異,Fg含量與模型組比較顯著增多;鏡下觀測腸系膜微循環較模型組有顯著改善
   
      結論 模型組具有明顯的內皮損傷及微血栓形成客觀指標的改變,符合絡脈瘀阻的病機特點,通心絡超微粉對絡脈瘀阻具有顯著防治效應。
   
      心血管疾病已成為嚴重危害人類健康、影響生活質量的常見病。其發生髮展是一個慢性病理過程,並且發病率逐年上升,發病年齡呈年輕化,故心血管疾病的防治受到當今醫學界的廣泛關注。
      絡病理論――醫學界塵封多年的古老中醫理論在心血管病的防治中彰顯出重要的理論和實踐價值絡病學說即「久病入絡」的學術體系,萌芽于春秋戰國時期的《黃帝內經》,至漢代張仲景《金匱要略》得到發展,清代葉天士的《臨症指南醫案》提出「久病入絡」說與「久痛入絡」說及其理、法、方、葯,形成完整的理論體系。
      血管內皮損傷是血管病變的始動和進展加重的關鍵因素,與絡氣虛滯導致各種致病因素損傷過程相一致。故本研究在內皮損傷基礎上建立廣泛微血栓形成模型,符合絡氣虛滯基礎上的絡脈瘀阻病理機制,迄今未見相關報道。
      由於中藥成分和體內作用的複雜性,加之對其作用機制、藥理藥效等方面的基礎研究嚴重不足,長期以來一直阻礙著中藥研製的現代化和國際化進程。因此,對中藥作用及其機制的深入研究,有助於進一步闡明許多血管性疾病的病理生理機制,探討通心絡超微粉對大鼠絡脈瘀阻的防治效應,具有重要的理論和臨床價值。
   
   
    材料和方法
     動物分組和處理
      將SPF 級雄性SD 大鼠(體重150~180 g)以標準顆粒飼料飼養,並隨機分為對照組、模型組和通心絡組。
      給予模型組蛋氨酸1 g/(kg・d)灌胃,飲水中加入琥珀磺胺噻唑(SST)0.5 g/kg,持續4周,建立大鼠內皮損傷模型。予以對照組純凈水灌胃,飲水中不加SST。通心絡組于蛋氨酸灌胃第4周開始加服臨床等效量通心絡0.4 g/kg,持續7天。4周后,給予模型組和通心絡組腹腔注XXCa 10 mg/kg,16 h 后腹腔注XX細菌LPS 0.2 mg/kg。實驗中鏡下觀察大鼠腸系膜微循環變化,並進行血小板計數和檢測凝血功能。注XXLPS 24 h後頸動脈采血,檢測血液流變指標及血漿NO和血管性血友病因子(vWF)水平,結束實驗。
     血生化指標
     採用酶聯免疫吸附抗體夾心法原理測定vWF水平,採用硝酸還原酶法測定血漿NO,實驗過程均嚴格按照試劑盒說明書操作。
     微循環觀察
      注XXLPS(對照組予以生理鹽水注XX)后20 h,觀測大鼠腸系膜微循環。實驗前將SD大鼠禁食12 h,用4%戊巴比妥鈉腹腔注XX麻醉固定於特定鼠板上,于腹腔一側行3~4 cm切口,輕輕拉出腸系膜,置於37.0°C的恆溫水浴槽內,選擇適宜觀察部位並固定,置於三目顯微鏡下觀察正常腸系膜微循環血流速度及流態,並通過BI-2000 醫學圖像分析系統錄像,採用微血管流態半定量法進行分級計分統計。
     凝血指標
     腹腔注XXCa/LPS前和注XXLPS(對照組予以生理鹽水注XX)后20 h,分別行心臟采血1 ml,與3.8%枸櫞酸鈉按9:1混合均勻,以3000轉4°C離心15 min,收集血漿,在2小時內檢測凝血酶時間(TT)、凝血酶原時間(PT)、APTT、Fg含量。另心臟采血0.5 ml,使用1.8 mg/ml EDTA抗凝管收集血液,4℃離心15 min,收集血漿2 h內檢測血小板計數(PLT)。以上均送中山大學附屬第一醫院檢驗醫學部檢測。
     血液流變學指標
     實驗結束時(注XXLPS/生理鹽水后24h),頸動脈采血3.5 ml,與3.8%枸櫞酸鈉按9∶1混合均勻。設定室內溫度為25~28℃,水浴溫度為30℃,使用六電極測定高、低切全血黏度(WBV)。
     數據處理
     檢測結果以均數±標準差(X±S)表示,結果應用SPSS11.0統計軟體進行One-Way ANOVA統計分析。
    (末完待續)
    表 1 注XX角叉菜膠前各組大鼠的凝血指標檢測結果(X±S,n=8)
分組
PT(s)
APTT(s)
TT(s)
Fg (g/L)
對照組
8.65±0.298
21.30±1.576
54.413±5.85
92.373±0.265
模型組
8.541±0.212
19.643±1.053*
55.928±6.05
82.116±0.472
通心絡組
9.55±1.596
23.588±1.549**##
54.039±7.597
1.89±0.21**
      PT:凝血酶原時間,APTT:活化部分凝血活酶時間,TT:凝血酶時間,Fg:纖維蛋白原。
      與對照組比較:*P<0.05、**P<0.01,與模型組比較:##P<0.01(相關內容見下期)。
    表 2 注XX脂多糖20 h后各組大鼠的凝血指標檢測結果(X±S,n=8)
分組
PT(s)
APTT(s)
TT(s)
Fg (g/L)
PLT(×10-9)
對照組
8.56±0.298
21.30±1.576
54.413±5.859
2.373±0.265
764.12±84.13
模型組
9.229±0.727
24.129±1.765**
51.943±6.245
1.869±0.243**
442.14±67.19 **
通心絡組
8.50±1.912
22.814±2.164
55.363±5.815
648.87±75.11**##
3.008±0.556*##
      PT:凝血酶原時間,APTT:活化部分凝血活酶時間,TT:凝血酶時間,Fg:纖維蛋白原,PLT:血小板計數。
      與對照組比較:*P<0.05、**P<0.01,與模型組比較:##P<0.01

   結果
    高同型半胱氨酸血症誘導血管內皮功能障礙
      我們對實驗大鼠採用蛋氨酸灌胃4 w,誘導高同型半胱氨酸血症。其血漿血管性血友病因子(vWF)水平顯著升高,一氧化氮(NO)水平降低,內皮依賴性血管舒張功能顯著降低,提示血管內皮功能受損,大鼠內皮功能障礙模型複製成功。
   
      通心絡改善大鼠凝血功能
      與對照組比較(表1、表2,見4月17日C11版),模型組在注XX角叉萊膠(Ca)前,活化部分凝血活酶時間(APTT)縮短,而在注XX聯合脂多糖(LPS)20 h后,APTT時間顯著延長、纖維蛋白原(Fg)含量顯著減少,血小板計數也顯著小於對照組。研究提示:模型組在注XXLPS 20 h后體內廣泛微血栓形成,血液處於消耗性低凝狀態。
      通心絡組與對照組比較(表1、表2,見4月17日C11版),在注XXCa前,APTT時間顯著延長,而在注XXLPS 20 h后,APTT時間與正常組比較無顯著差異;Fg含量在注XXCa前,與對照組比較明顯減少,在注XXLPS 20 h后,與模型組比較顯著增多,血小板計數雖仍然顯著小於對照組,但顯著大於模型組。研究提示:通心絡可以減輕LPS 的毒性作用,有效推遲並阻止LPS 啟動凝血的過程。
   
    通心絡降低全血比黏度改善腸系膜微循環
      模型組全血比黏度(WBV)高、低切均顯著高於對照組,而通心絡組WBV高、低切雖顯著高於對照組,但均顯著低於模型組(表3)。
      鏡下可見模型組毛細血管甚至小血管阻塞,血管邊緣模糊,血管周圍瀰漫性、片狀滲血或大片瘀血,血液流態異常,顆粒感明顯,呈粒緩流或粒擺流,紅細胞呈中、重度聚集。通心絡組觀測腸系膜微循環,可見血流速度明顯加快,偶見瘀血,無滲血,基本無紅細胞聚集現象。採用微血管流態半定量法測定流態分級計分值(表4)。
   
    討論
      絡病與心腦血管疾病有著密切的相關性。絡病的形成是由氣到血、由功能病變到器質損傷的慢XX理過程,絡氣虛滯是這一病變的起因。絡氣不僅推動血液在脈絡中運行,而且維持著脈絡的正常功能狀態。絡脈是從經脈中支橫別出,逐層細分的網路,絡脈中運行的是血液。絡脈包括現代醫學從大血管依次分出的中、小血管等各級血管,更多的是指小血管和微血管。絡氣損傷、絡脈的自穩和調節功能失常招致多種致病因素,如瘀血阻絡、痰濕阻絡、寒凝絡脈等。絡脈瘀阻是在絡氣虛滯的基礎上發展而來的由功能XX變發展為器質性損傷的重要病程階段,並且從小動脈微動脈及微循環的「黏」、「稠」、「凝」、「滯」等方面考慮,因此,絡脈瘀阻的動物模型應該考慮在血管內皮損傷的基礎上,建立廣泛的微血栓形成模型,以便更好的反映絡脈瘀阻的病理變化。
      血管內皮不僅具有屏障功能,而且具有重要的信息傳遞和內分泌功能,其中NO是血管內皮所合成分泌的最重要的血管活性物質。NO具有擴張血管,抗血小板黏附聚集,抗血管平滑肌細胞增生等作用。vWF是一種多聚糖蛋白,是血小板黏附於受損血管壁不可缺少的蛋白,可促進血小板的黏附與聚集。血管內皮細胞受損后,vWF大量釋放入血,血漿vWF含量增高,促進血小板黏附與聚集,並且vWF分子量較大,其升高還可導致血液黏度增加,形成血小板血栓,促進血栓的形成。故vWF水平隨內皮損傷程度的加重而增加,與血栓的形成密切相關。我們既往的研究表明,高同型半胱氨酸血症能抑制內皮依賴性的血管舒張功能,降低血漿NO水平,提高血漿vWF水平,證實高同型半胱氨酸血症造成了大鼠血管內皮損傷及功能障礙。
      LPS是革蘭陰性菌的主要表面成分,在血栓形成中扮演著非常重要的角色。目前注XXLPS多用於複製感染性損傷模型,多給予較大劑量靜脈注XX,而本試驗考慮在大鼠內皮損傷基礎上建立廣泛微血栓形成模型,故選擇誘導劑量Ca注XX后,使用小劑量LPS腹腔注XX,既造成炎症反應后的微血栓形成,又確保動物的存活率。結果顯示,給予模型組大鼠注XXLPS 20h檢測凝血指標,其中APTT延長、Fg含量減小,血小板計數減少,說明由於廣泛的微血栓形成造成大量凝血因子及血小板消耗,導致血液處於消耗性低凝期。血液濃縮,血液黏度增高,腸系膜微循環瘀血、血栓情況嚴重,可見大片瘀血及滲血,血流速度緩慢、流態異常。絡脈瘀阻動物模型成功建立。
      使用通心絡超微粉干預該絡脈瘀阻模型,可顯著降低全血比黏度,保護內皮細胞,改善血液流變,還可顯著增加血小板計數,在微血栓形成過程中抑制血小板聚集,減少血栓形成對血小板的消耗;在注XXLPS前檢測凝血指標,APTT時間較正常組延長,而Fg含量卻顯著減少,表明通心絡超微粉可能是通過減少Fg在肝髒的合成,而具有一定的抗凝作用。其機制有待進一步探討。在注XXLPS 20 h后,APTT時間保持在正常水平,而Fg含量較模型組明顯增加,提示通心絡超微粉減輕了LPS 的毒性作用,有效推遲並阻止了LPS 啟動凝血過程的病理生理作用,進一步證實了通心絡超微粉可以有效阻止微血栓形成,起到保護血管內皮和改善微循環障礙的作用。
      綜上所述,建立絡脈瘀阻大鼠模型,以研究通心絡防治絡脈瘀阻的作用,方法簡單易行、結果穩定可靠,並且基本符合絡病的重要病理變化「絡脈瘀阻」的發生髮展過程。通過通心絡超微粉對該模型的干預可以看出,通心絡超微粉可有效保護血管內皮,防止體內廣泛微血栓形成,有效改善微循環障礙,是防治心血管疾病的有效中藥製劑,對臨床用藥具有重要指導價值。(參考文獻從略)
    (葉子 整理)
    表3 注XX脂多糖20小時后全血比黏度結果(X±S,n=7)
分組
WBV(mPa s)
比黏度高切(20s-1)
比黏度低切(80s-1)
對照組
3.052±0.209
5.209±0.375
模型組
5.520±0.289**
6.992±0.296**
通心絡組
3.839±0.140**
6.030±0.213**##
      WBV:全血比黏度。
      與對照組比較:**P<0.01,與模型組比較:##P<0.01。
    表 4 通心絡超微粉對大鼠腸系膜微循環血液流態的改善(X±S)
分組
n
1~3級
3~5級
5~7級
計分值
對照組
10
10
0
0
1.54±0.398
模型組
10
0
3
7
5.29±0.709**
通心絡組
10
4
6
0
3.02±0.503**##
      與對照組比較:**P<0.01,與模型組比較:##P<0.01。

推薦閱讀